ABP1基因的克隆及其轉(zhuǎn)化超級(jí)稻的初步研究.pdf

1、本文以超級(jí)稻“兩優(yōu)培九”為材料，克隆了生長(zhǎng)素結(jié)合蛋白ABPlcDNA，構(gòu)建了ABP1基因表達(dá)載體，優(yōu)化了超級(jí)稻離體再生培養(yǎng)的條件，并采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將ABPl基因?qū)肓顺?jí)稻愈傷組織?，F(xiàn)概述如下： 1.生長(zhǎng)素結(jié)合蛋白ABPleDNA的克?。?從數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索獲得了一條水稻cDNA序列，利用生物信息學(xué)方法對(duì)其進(jìn)行分析，之后對(duì)其進(jìn)行了全長(zhǎng)驗(yàn)證。確定此序列為水稻的ABPleDNA。以此序列為指導(dǎo)，利用RT-PCR擴(kuò)增超級(jí)稻ABP

2、leDNA，并克隆測(cè)序，測(cè)序結(jié)果與電子搜索結(jié)果一致。 2.ABPl基因表達(dá)載體的構(gòu)建： 根據(jù)克隆的超級(jí)稻ABPleDNA序列，設(shè)計(jì)兩條ABPleDNA特異擴(kuò)增引物ABP正義上游引物Xba I、ABP正義下游引物BanH L在引物5’末端分別加上限制性內(nèi)切酶：Xba I和BamH I的識(shí)別序列，在識(shí)別序列的5’端加上保護(hù)序列GGCG，進(jìn)行PCR擴(kuò)增；然后將PCR產(chǎn)物酶切液和pBI121質(zhì)粒酶切液通過(guò)連接酶進(jìn)行連接，之后轉(zhuǎn)化

3、E.coli JM109感受態(tài)細(xì)胞，構(gòu)建ABP1基因的表達(dá)載體。 3.超級(jí)稻離體再生培養(yǎng)條件的優(yōu)化： a.通過(guò)對(duì)超級(jí)稻組織培養(yǎng)條件的研究，確定了超級(jí)稻最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基配方為：MS+蔗糖30 g/L+瓊脂7 g/L+2，4-D 2 mg/L+KT 1 mg/L；最佳分化培養(yǎng)基為：MS+蔗糖30 g/L+瓊脂7 g/L+6-BA 2 mg/L+KT 1 mg/L+NAA 0.5 mg/L。 b.分化培養(yǎng)基中銅元素的添加