超級(jí)稻組織培養(yǎng)及農(nóng)桿菌介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)化的研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、本文以我校培育出的超級(jí)稻沈農(nóng)606和沈農(nóng)265為試材,從成熟胚愈傷組織的誘導(dǎo),愈傷組織的繼代,細(xì)胞懸浮培養(yǎng)和原生質(zhì)體的分離,植株再生等方面進(jìn)行了研究,優(yōu)化了沈農(nóng)606和沈農(nóng)265的組織培養(yǎng)條件,建立了高效的植株再生體系。并且以沈農(nóng)265的愈傷組織為受體,進(jìn)行了農(nóng)桿菌介導(dǎo)外源基因轉(zhuǎn)化的研究。主要結(jié)果如下: 1.沈農(nóng)606和沈農(nóng)265的成熟胚在以MS為基本培養(yǎng),添加3mg/L2,4-D,30g/L蔗糖,0.8%瓊脂,pH為5.8的誘

2、導(dǎo)培養(yǎng)上,27℃條件下培養(yǎng)30天,能夠誘導(dǎo)出質(zhì)量較好的愈傷組織,誘導(dǎo)率均可以達(dá)到90%以上。研究還表明生長(zhǎng)素2,4-D對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)起著主要作用;適量的6-BA和ABA對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)起到一定的積極作用,但效果不明顯;蔗糖濃度高于40g/L時(shí),誘導(dǎo)率急劇下降;愈傷組織的誘導(dǎo)受溫度的影響很大;而有無(wú)光照對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)沒(méi)有影響。 2.優(yōu)化出沈農(nóng)606和沈農(nóng)265的愈傷組織繼代培養(yǎng)基為:以N6為基本培養(yǎng),添加2.5mg/L的2,4

3、-D和500mg/L的脯氨酸,蔗糖濃度為30g/L,瓊脂8g/L,pH為5.8。在這樣的培養(yǎng)上兩個(gè)品種的愈傷組織可以快速的生長(zhǎng)增殖。沈農(nóng)606的繼代時(shí)間為不超過(guò)27天,沈農(nóng)265的繼代時(shí)間為30天以?xún)?nèi)。在繼代過(guò)程中在基本培養(yǎng)基對(duì)愈傷組織生長(zhǎng)影響顯著,其中N6最有利于愈傷組織生長(zhǎng);培養(yǎng)基中添加細(xì)胞分裂素對(duì)愈傷組織的生長(zhǎng)沒(méi)有促進(jìn)作用;在繼代培養(yǎng)基中添加脯氨酸可以顯著促進(jìn)愈傷組織的生長(zhǎng),而水解酪蛋白和谷氨酰胺作用不顯著;蔗糖濃度對(duì)愈傷組織生長(zhǎng)

4、影響顯著,30g/L的蔗糖最有利于愈傷組織生長(zhǎng);光照對(duì)愈傷組織的增殖沒(méi)有影響,但是卻可以影響愈傷組織的生長(zhǎng)狀態(tài),容易使其失去胚性而變白。 3.以N6為基本培養(yǎng)基,添加2mg/L的2,4-D,1000mg/L的脯氨酸,30g/L的蔗糖,pH為5.8的液體培養(yǎng)基有利于沈農(nóng)265細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的生長(zhǎng)增殖。細(xì)胞團(tuán)在懸浮培養(yǎng)過(guò)程中,生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素對(duì)其增殖影響不顯著;而脯氨酸可以顯著促進(jìn)細(xì)胞團(tuán)的生長(zhǎng)。以懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞團(tuán)為外植體,利用上海生

5、產(chǎn)的纖維素酶和其他試劑組成的酶液可以成功地分離到原生質(zhì)體。 4.將沈農(nóng)606和沈農(nóng)265懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞團(tuán),接種于以N6為基本培養(yǎng)基,添加6-BA4mg/L、NAA 0.5mg/L、30g/L蔗糖、0.8%瓊脂的分化培養(yǎng)基上,可以較好的獲得再生植株。細(xì)胞團(tuán)經(jīng)過(guò)懸浮培養(yǎng)可以更好的保持胚性,分化能力較強(qiáng),而愈傷組織長(zhǎng)期繼代后失去分化能力。通過(guò)對(duì)懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞團(tuán)長(zhǎng)期繼代培養(yǎng),可以促進(jìn)細(xì)胞團(tuán)中體細(xì)胞胚的形成,通過(guò)體細(xì)胞胚發(fā)生途徑更容易獲得

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