MMP-2敏感型聚乙二醇水凝膠聯(lián)合去細(xì)胞瓣制備復(fù)合支架的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文共分三部分：
　　 第一部分：基質(zhì)金屬蛋白酶底物肽的合成和檢測(cè)
　　 目的：分別制備對(duì)基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）高度敏感的MMP(W)X 肽和對(duì)MMP-2不敏感的MMP(DF)X肽，進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)。
　　 方法：采用Fmoc固相合成法制備MMP(W)X 肽和MMP(DF)X肽，MMP(W)X 肽的氨基酸序列為Ac-CRD-GPQG↓IWGQ-DRC-NH2，MMP(DF)X肽的氨基酸序列為Ac-CRD-G

2、DQGIAGF-DRC-NH2。采用高效液相色譜法和質(zhì)譜進(jìn)行鑒定。
　　 結(jié)果：MMP(W)X肽高效液相色譜分析其純度為99.06％，質(zhì)譜檢測(cè)分子量為1632.79/摩爾；MMP(DF)X肽高效液相色譜分析其純度為99.29％，質(zhì)譜檢測(cè)分子量為1553.69/摩爾。
　　 結(jié)論：MMPs底物肽能夠體外合成并用于組織工程研究。
　　 第二部分：基質(zhì)金屬蛋白酶底物肽聚乙二醇復(fù)合水凝膠的制備及性質(zhì)研究
　　 目

3、的：采用分子量20,000Da丙烯酰化四分枝狀聚乙二醇（4-arm-PEG-Ac）和基質(zhì)金屬蛋白酶底物肽制備可降解復(fù)合水凝膠，并檢測(cè)其性能。
　　 方法：利用已制備的基質(zhì)金屬蛋白酶底物肽，聯(lián)合丙烯?；姆种罹垡叶贾苽錆舛葹?0％(w/v)的復(fù)合水凝膠。MMP(W)X 肽復(fù)合PEG水凝膠為實(shí)驗(yàn)A組，MMP(DF)X肽復(fù)合PEG水凝膠為實(shí)驗(yàn)B組，對(duì)照C組為單純PEG水凝膠。比較三種水凝膠在37℃磷酸鹽緩沖液中的降解情況，再外源性

4、添加MMP-2，觀察三種水凝膠降解情況。檢測(cè)三組水凝膠的細(xì)胞毒性。在制膠過(guò)程中包埋轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-β1），檢測(cè)各組水凝膠對(duì)TGF-β1的緩釋效果。
　　 結(jié)果：磷酸鹽緩沖液中A、B、C三組水凝膠4周累計(jì)降解率分別為68.36％、64.23％、66.28％，三者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；分別添加MMP-2，A組4周累計(jì)降解率為83.75％，降解速度加快，B、C組則變化不明顯。MTT法檢測(cè)復(fù)合PEG水凝膠無(wú)細(xì)胞毒性。A

5、、B、C三組水凝膠TGF-β17天累計(jì)釋放率分別為59.63％、53.18％、44.36％，三者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；分別添加MMP-2后，A組對(duì)TGF-β1 釋放速度明顯加快。
　　 結(jié)論：MMPs底物肽PEG復(fù)合水凝膠結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性。其中對(duì)MMP-2敏感型復(fù)合PEG水凝膠對(duì)生長(zhǎng)因子TGF-β1有良好的控釋效果，有望應(yīng)用于新型組織工程心臟瓣膜支架材料的研制。
　　 第三部分：MMP-2敏感型聚乙二醇

6、水凝膠聯(lián)合去細(xì)胞瓣制備復(fù)合支架
　　 目的：制備對(duì)MMP-2敏感型聚乙二醇水凝膠去細(xì)胞瓣復(fù)合支架，并檢測(cè)其相關(guān)生物學(xué)性能。
　　 方法：采用酶+去污劑法制備去細(xì)胞瓣。在MMP-2敏感型聚乙二醇水凝膠成膠過(guò)程中，利用化學(xué)交聯(lián)劑碳化二亞胺（EDC）將復(fù)合水凝膠與去細(xì)胞瓣充分耦聯(lián)，制備復(fù)合支架。進(jìn)行HE染色和電鏡掃描觀察與DNA含量、羥脯氨酸含量以及瓣葉生物力學(xué)檢測(cè)。
　　 結(jié)果：形態(tài)學(xué)觀察見(jiàn)復(fù)合支架細(xì)胞外基質(zhì)緊密，膠