應(yīng)用聚乙二醇-聚己內(nèi)酯制備去細(xì)胞組織工程心臟瓣膜支架的研究.pdf

1、目的：
　　應(yīng)用甲氧基聚乙二醇-聚己內(nèi)酯（methoxypoly(ethyleneglycol)-poly(ε-caprolactone)，MPEG-PCL）作為去細(xì)胞試劑，探索其對(duì)豬主動(dòng)脈瓣的去細(xì)胞效果，并與目前常用的兩種去細(xì)胞試劑（曲拉通（TritonX-100）和脫氧膽酸鈉（sodiumdeoxycholate，SD））在組織形態(tài)、瓣膜相關(guān)成分、生物相容性及力學(xué)性能等方面作比較，旨在為組織工程心臟瓣膜的構(gòu)建研究提供一種新穎的

2、去細(xì)胞方法。
　　方法：
　　采用開環(huán)聚合法合成MPEG-PCL，并對(duì)其進(jìn)行傅里葉紅外光譜和核磁共振氫譜表征。新鮮豬主動(dòng)脈瓣分別用不同濃度的MPEG-PCL進(jìn)行去細(xì)胞處理，依據(jù)組織形態(tài)學(xué)觀察確定最佳去細(xì)胞濃度，并以此濃度MPEG-PCL與同濃度曲拉通和脫氧膽酸鈉分別對(duì)主動(dòng)脈瓣進(jìn)行處理（A組：MPEG-PCL，B組：TritonX-100，C組：SD，D組：正常瓣膜）。采用HE、MASSON染色和掃描電鏡從組織形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)3種試

3、劑的去細(xì)胞效果，再測(cè)定瓣膜相關(guān)成分，測(cè)定生物相容性和力學(xué)性能并通過細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)測(cè)定各組去細(xì)胞瓣的毒性，從多方面評(píng)價(jià)各組瓣膜去細(xì)胞效果。
　　結(jié)果：
　　傅里葉紅外光譜顯示合成的共聚物具有MPEG鏈段和PCL鏈段的伸縮振動(dòng)峰(3443.05cm-1、1728.66cm-1、1109.81cm-1)，核磁共振氫譜顯示合成的共聚物具有MPEG鏈段和PCL鏈段的質(zhì)子峰(?1.38、1.65、2.31、4.06、3.64ppm)，通過

4、紅外光譜和核磁共振氫譜表征顯示，成功合成MPEG-PCL，且共聚物的分子量約為4000D。對(duì)于經(jīng)不同濃度MPEG-PCL處理的豬主動(dòng)脈瓣，從光學(xué)顯微鏡下觀察，濃度為1％MPEG-PCL去細(xì)胞效果良好，細(xì)胞去除完全且瓣膜纖維結(jié)構(gòu)保持完整。1％MPEG-PCL與同濃度的曲拉通和脫氧膽酸鈉對(duì)瓣膜進(jìn)行去細(xì)胞處理，并與正常瓣膜組比，各去細(xì)胞組瓣膜殘留DNA量明顯減少（A：5.00±0.11ng/mgVS.B：21.26±0.84ng/mgVS.C

5、：16.31±0.83ng/mgVS.D：336.94±9.33ng/mg）（P<0.05），其中以MPEG-PCL組殘存最少。各去細(xì)胞組瓣膜彈性蛋白含量減少（A：202.43±22.70ng/mgVS.B：226.82±25.21ng/mgVS.C：209.43±17.54ng/mgVS.D：326.39±43.74ng/mg）。而各去細(xì)胞組瓣膜含水量和膠原蛋白含量與正常瓣膜組比，未見明顯變化。各去細(xì)胞組瓣膜均見一定程度的血小板黏附，

6、但各去細(xì)胞組的溶血率較正常組小。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)表明，MPEG-PCL無(wú)細(xì)胞毒性，細(xì)胞增殖率在24小時(shí)和48小時(shí)均高于TritonX-100和SD（24h/48h：A：97.16±1.66％/98.30±1.28％VS.B：87.17±0.41％/86.79±3.10％VS.C：77.22±1.96％/72.90±2.75％VS.D：97.70±1.41％/97.72±0.72％）。從力學(xué)性能上，各去細(xì)胞瓣膜組在圓周和徑向方向的相關(guān)力學(xué)性能