PISD在結(jié)直腸腫瘤中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、背景：腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與一系列的基因改變有關(guān)，其中與結(jié)直腸癌有關(guān)的有APC-Wnt信號(hào)通路的異常，錯(cuò)配修復(fù)（MMR）缺陷，RAF瀑布鏈，抑癌基因p53的改變和染色體的互換。PISD、NIBP、BAI2、STOML1、MRPL21、MRPL16、MKKS這7個(gè)新基因在結(jié)直腸腫瘤中已被發(fā)現(xiàn)高表達(dá)，但其在蛋白水平及組織中的表達(dá)情況目前仍不得而知。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)熒光定量PCR、免疫組化、蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）進(jìn)一步探討這7個(gè)新發(fā)現(xiàn)

2、的基因在大腸癌細(xì)胞株及組織內(nèi)表達(dá)情況以及其與臨床病理的關(guān)系。
　　 方法：應(yīng)用熒光定量PCR法檢測(cè)HT-29、Colo205、SW480、CoCa2、HCT116、SW1116、SW620大腸癌細(xì)胞株，對(duì)7種基因表達(dá)情況進(jìn)行初篩。對(duì)于高表達(dá)的基因應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法(WB)測(cè)定其蛋白表達(dá)水平。對(duì)于在基因及蛋白水平均高表達(dá)的基因，用免疫組化法檢測(cè)腫瘤組織和癌旁正常組織表達(dá)情況，探究其與結(jié)直腸腫瘤的臨床病理關(guān)系。
　　 結(jié)果：對(duì)

3、大腸癌細(xì)胞株進(jìn)行初步的熒光定量PCR篩查，測(cè)定其細(xì)胞拷貝數(shù)，MRPL21、MRPL16、MKKS、PISD這四個(gè)基因具有較高的表達(dá)量，且在不同的細(xì)胞株內(nèi)表達(dá)差異較小。進(jìn)一步選擇PISD與MRPL21這兩個(gè)基因進(jìn)行了Western blot檢測(cè)，PISD蛋白在7種細(xì)胞株中均檢測(cè)到一條特異性條帶，大小約為55Kda，而MRPL21則未能檢測(cè)出特異性條帶。選擇OD-CT-DgLim01-001大腸癌組織芯片，進(jìn)行免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)。PISD在正

4、常癌旁組織均為陰性表達(dá)。在93例（186點(diǎn)位）結(jié)腸直腸腫瘤組織中，總陽(yáng)性表達(dá)率為62.9％(117/186點(diǎn)位)。結(jié)直腸癌組織和正常結(jié)直腸組織中，PISD的表達(dá)與年齡、性別、腫瘤部位大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況無(wú)關(guān)。但與腫瘤分化程度、腫瘤的浸潤(rùn)深度存在明顯相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　 結(jié)論: PISD在大腸癌組織中中表達(dá)顯著上調(diào)，提示PISD在結(jié)直腸癌發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中可能起著重要的作用并可能成為診斷乃至基因治療的靶點(diǎn)