HIF-1α及VEGF在大鼠腦室出血模型中的表達及意義.pdf

1、目的:原發(fā)性腦室出血是指出血位于腦室脈絡(luò)叢或室管膜下區(qū)1.5cm以內(nèi)，局限于腦室系統(tǒng)的出血。它是一種臨床較為少見但極其嚴(yán)重的急癥，具有高致殘率與高死亡率的特點。本實驗通過側(cè)腦室注血法建立大鼠腦室出血模型，應(yīng)用Westernbloting技術(shù)檢測腦室出血后不同時間點室管膜下區(qū)HIF-1α及VEGF蛋白的表達變化，并探討HIF-1α和VEGF在腦室出血后腦組織損傷過程中可能發(fā)揮的作用機制。
　　 方法:1.健康成年SD雄性大鼠60只

2、，體重300g±10g。采用隨機數(shù)字法分為手術(shù)組(n=50)與假手術(shù)組(n=10)，每組10只。2.參照K.R.Lodhia的報道的方法建立大鼠側(cè)腦室出血模型，并進行一定程度改進。側(cè)腦室注血組是將160ul非抗凝自體鼠尾動脈血分2次注入到右側(cè)腦室，建立腦室出血模型，按提取標(biāo)本的時間不同分為術(shù)后1、2、5、7、14天五個時間點。假手術(shù)組動物僅切開頭皮，于定位點鉆孔穿刺并注射160μ1雙蒸水。各組大鼠于同一環(huán)境單獨喂養(yǎng)。3.手術(shù)組動物按照規(guī)

3、定時間點行神經(jīng)行為學(xué)評分后處死，假手術(shù)組于術(shù)后2小時處死。動物于生物冰塊上斷頭取腦，沿穿刺點冠狀切開腦組織，觀察側(cè)腦室寬度及形態(tài)變化后，取室管膜下區(qū)腦組織置于液氮驟冷2小時后，于-80度冰箱保存。采用westernbloting技術(shù)檢測腦室出血后HIF-1α和VEGF的時序性表達規(guī)律與出血時間的相關(guān)關(guān)系。4.統(tǒng)計學(xué)分析:使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。組間計量資料比較采用t檢驗，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

4、
　　 結(jié)果:1.一般情況觀察:腦室注血組大鼠麻醉清醒后均出現(xiàn)不同程度精神萎靡，活動少，飲水及攝食量明顯減少，體重隨時間逐漸下降。不同時間點大鼠神經(jīng)功能缺損評分:術(shù)后1、2、5、7、14天分別為10.8±1.1，13.6±0.9，15.7±1.2，16.4±1.2，17.9±1.1.假手術(shù)組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分無異常（19分），經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗，腦室注血組1、2天與假手術(shù)組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。2.免疫印記WesternB

5、loting結(jié)果:(1)HIF-1α蛋白:在腦室注血組第1天即可見明顯條帶出現(xiàn)，第2天時條帶增寬，達到高峰，第5天后開始減少，到第14天條帶幾乎不可見，與假手術(shù)組相當(dāng)。除第14天組外，其余各實驗組與對照組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。各實驗組間比較，除第1天與第5天之間無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)外，其余各組之間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);(2)VEGF蛋白:在實驗組第1天可見條帶出現(xiàn)，第2天明顯有增寬，達到高峰，到

6、第五天后開始減少，第14天條帶已基本不可見。除第14天外，其余各實驗組與假手術(shù)組比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，各實驗組間比較，除第1天與第5天之間無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)外，其余各組之間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:1.本實驗采用大鼠自體動脈血注入側(cè)腦室的方法建立大鼠腦室出血的模型，動物死亡率低，模型較穩(wěn)定，使用非抗凝的動脈血更符合腦室出血的發(fā)病過程，能夠較好的模擬臨床上腦室出血后的各種病理生

7、理變化。2.腦室出血后HIF-1α在室管膜下區(qū)的表達具有時間相關(guān)性，第1天即有明顯表達，第2天達到高峰，第5天有所下降，到第14天與對照假手術(shù)組已無明顯差別。3.VEGF的表達也具有時序性，在腦室注血后第1天已有表達，第2天明顯增加，到第5天開始下降，第14天與對照假手術(shù)組已無明顯差別。4.腦室出血后腦室內(nèi)血腫對腦室壁的機械壓迫作用及腦脊液循環(huán)吸收障礙導(dǎo)致腦室擴張，顱內(nèi)壓升高，腦血流灌注不足，引起腦組織缺血缺氧。HIF-1α與VEGF在