HIF-1α及VEGF在大鼠腦室出血模型中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:原發(fā)性腦室出血是指出血位于腦室脈絡(luò)叢或室管膜下區(qū)1.5cm以內(nèi)，局限于腦室系統(tǒng)的出血。它是一種臨床較為少見但極其嚴(yán)重的急癥，具有高致殘率與高死亡率的特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過側(cè)腦室注血法建立大鼠腦室出血模型，應(yīng)用Westernbloting技術(shù)檢測(cè)腦室出血后不同時(shí)間點(diǎn)室管膜下區(qū)HIF-1α及VEGF蛋白的表達(dá)變化，并探討HIF-1α和VEGF在腦室出血后腦組織損傷過程中可能發(fā)揮的作用機(jī)制。
　　 方法:1.健康成年SD雄性大鼠60只

2、，體重300g±10g。采用隨機(jī)數(shù)字法分為手術(shù)組(n=50)與假手術(shù)組(n=10)，每組10只。2.參照K.R.Lodhia的報(bào)道的方法建立大鼠側(cè)腦室出血模型，并進(jìn)行一定程度改進(jìn)。側(cè)腦室注血組是將160ul非抗凝自體鼠尾動(dòng)脈血分2次注入到右側(cè)腦室，建立腦室出血模型，按提取標(biāo)本的時(shí)間不同分為術(shù)后1、2、5、7、14天五個(gè)時(shí)間點(diǎn)。假手術(shù)組動(dòng)物僅切開頭皮，于定位點(diǎn)鉆孔穿刺并注射160μ1雙蒸水。各組大鼠于同一環(huán)境單獨(dú)喂養(yǎng)。3.手術(shù)組動(dòng)物按照規(guī)

3、定時(shí)間點(diǎn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分后處死，假手術(shù)組于術(shù)后2小時(shí)處死。動(dòng)物于生物冰塊上斷頭取腦，沿穿刺點(diǎn)冠狀切開腦組織，觀察側(cè)腦室寬度及形態(tài)變化后，取室管膜下區(qū)腦組織置于液氮驟冷2小時(shí)后，于-80度冰箱保存。采用westernbloting技術(shù)檢測(cè)腦室出血后HIF-1α和VEGF的時(shí)序性表達(dá)規(guī)律與出血時(shí)間的相關(guān)關(guān)系。4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。組間計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4、
　　 結(jié)果:1.一般情況觀察:腦室注血組大鼠麻醉清醒后均出現(xiàn)不同程度精神萎靡，活動(dòng)少，飲水及攝食量明顯減少，體重隨時(shí)間逐漸下降。不同時(shí)間點(diǎn)大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分:術(shù)后1、2、5、7、14天分別為10.8±1.1，13.6±0.9，15.7±1.2，16.4±1.2，17.9±1.1.假手術(shù)組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分無異常（19分），經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，腦室注血組1、2天與假手術(shù)組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。2.免疫印記WesternB

5、loting結(jié)果:(1)HIF-1α蛋白:在腦室注血組第1天即可見明顯條帶出現(xiàn)，第2天時(shí)條帶增寬，達(dá)到高峰，第5天后開始減少，到第14天條帶幾乎不可見，與假手術(shù)組相當(dāng)。除第14天組外，其余各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。各實(shí)驗(yàn)組間比較，除第1天與第5天之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)外，其余各組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);(2)VEGF蛋白:在實(shí)驗(yàn)組第1天可見條帶出現(xiàn)，第2天明顯有增寬，達(dá)到高峰，到

6、第五天后開始減少，第14天條帶已基本不可見。除第14天外，其余各實(shí)驗(yàn)組與假手術(shù)組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，各實(shí)驗(yàn)組間比較，除第1天與第5天之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)外，其余各組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:1.本實(shí)驗(yàn)采用大鼠自體動(dòng)脈血注入側(cè)腦室的方法建立大鼠腦室出血的模型，動(dòng)物死亡率低，模型較穩(wěn)定，使用非抗凝的動(dòng)脈血更符合腦室出血的發(fā)病過程，能夠較好的模擬臨床上腦室出血后的各種病理生

7、理變化。2.腦室出血后HIF-1α在室管膜下區(qū)的表達(dá)具有時(shí)間相關(guān)性，第1天即有明顯表達(dá)，第2天達(dá)到高峰，第5天有所下降，到第14天與對(duì)照假手術(shù)組已無明顯差別。3.VEGF的表達(dá)也具有時(shí)序性，在腦室注血后第1天已有表達(dá)，第2天明顯增加，到第5天開始下降，第14天與對(duì)照假手術(shù)組已無明顯差別。4.腦室出血后腦室內(nèi)血腫對(duì)腦室壁的機(jī)械壓迫作用及腦脊液循環(huán)吸收障礙導(dǎo)致腦室擴(kuò)張，顱內(nèi)壓升高，腦血流灌注不足，引起腦組織缺血缺氧。HIF-1α與VEGF在