23個(gè)油橄欖品種的RAPD分析.pdf

1、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文23個(gè)油橄欖品種的RAPD分析姓名：邱源申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：果樹學(xué)指導(dǎo)教師：王永清;韓華柏20070501摘要本研究采用R A P D 技術(shù)對(duì)2 3 個(gè)引種的油橄欖品種進(jìn)行分類和鑒定研究。首先針對(duì)油橄欖基因組D N A 的提取改良基因組D N A 的提取方法，以獲得較高質(zhì)量的油橄欖基因組D N A 用于R A P D 分析。然后對(duì)油橄欖R A P D 反應(yīng)體系體系進(jìn)行優(yōu)化，以建立最佳R A P D 擴(kuò)增體系，

2、篩選出適合油橄欖R A P D 分析的引物對(duì)樣品D N A 進(jìn)行P C R 擴(kuò)增。對(duì)樣品的R A P D 圖譜進(jìn)行分析，獲得各樣品的R A P D 分子特征，最后績(jī)計(jì)和分析數(shù)據(jù)，同時(shí)對(duì)樣品間的親緣關(guān)系進(jìn)行分析和討論。研究結(jié)果如下：( 1 ) 本研究采用改良C T A B 法，分別從新鮮和硅膠保存的油橄欖嫩葉中提取D N A ，與其他部位提取效果相比量大，純度高、褐化程度低；得到的D N A 產(chǎn)率達(dá)至91 9 4 - - - 3 5 2

3、n g ／m g ，O D 2 6 0 ／O D 2 8 0 為1 ．8 2 - - 2 ．0 8 。通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳分析，D N A 完整性較好，達(dá)到R A P D 試驗(yàn)的要求。( 2 ) 建立了油橄欖R A P D 最佳反應(yīng)體系：P C R 擴(kuò)增的總體積為2 0 旺，包括4 0 n ￡的模板D N A ，1 0 x P C R b u f f e r2 u L ，1 ．5 m m o l ／L M g C l 2 ，O ．2 m

4、m o l ／Ld N T P ，0 ．2 5 1 x m o l ／I _引物，T a q 酶1 U 。擴(kuò)增程序?yàn)椋? 4 。C 預(yù)變性2 r a i n ，9 4 9 C 變性4 5 s ，3 6 。C 退火l m i n ，7 2 0 C2 m i n ，4 0 個(gè)循環(huán)后在7 2 。C 延伸4 r a i n ，結(jié)束后在4 ℃條件下保存。最后用1 ．5 0 A的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其擴(kuò)增產(chǎn)物。( 3 ) 采用優(yōu)化后的反應(yīng)體系對(duì)8 0

5、 個(gè)引物進(jìn)行篩選，經(jīng)過(guò)三次重復(fù)，篩選出多態(tài)性和擴(kuò)增重復(fù)性好、譜帶清晰且較多的1 1 個(gè)引物，用于油橄欖全部D N A 樣品的R A P E分析。( 4 ) 應(yīng)用篩選出1 1 個(gè)引物進(jìn)行擴(kuò)增，共產(chǎn)生1 2 7 條帶，其中7 8 條為多態(tài)性帶，占6 1 ．4 ％，平均每個(gè)引物擴(kuò)增的D N A 帶數(shù)為1 1 ．5 5 條，多態(tài)性D N A 的帶數(shù)為7 ．0 E條。擴(kuò)增出的D N A 片段在3 0 0 —2 0 0 0b p 之間，其中尤以5

6、0 0 - - 1 2 0 0b p 之間最多。根據(jù)擴(kuò)增結(jié)果建立了品種間親緣關(guān)系的U P G M A 聚類圖，將2 3 個(gè)品種可劃分為2 六類。( 5 ) 對(duì)2 3 個(gè)油橄欖品種的分子特征進(jìn)行了分析，獲得了4 個(gè)品種的R A P D 特異標(biāo)記即阿維金娜在S l 0 1 l —6 0 0 b p 、小果卡林在S l o l 廣1 4 0 0 b p 和S 1 0 2 廣- 2 4 0 0 b p 、佛奧在S 1 0 2 5 —4 0 0