曲古霉素A聯合環(huán)巴胺對胰腺癌PANC-1細胞凋亡的影響.pdf

1、目的:本研究通過檢測單獨/聯合TSA、CYA用藥后胰腺癌PANC-1的細胞凋亡、凋亡相關基因表達的變化以及Hedgehog(Hh)信號通路的活性的改變，評價組蛋白去乙?；敢种苿┣琶顾谹(TSA)聯合Hedgehog(Hh)信號通路阻斷劑環(huán)巴胺(CYA)干預對胰腺癌PANC-1細胞凋亡的影響，并初步探討其機制。
　　方法:予以TSA、CYA單獨/聯合處理PANC-1細胞24h后，Hochest33258熒光染色觀察細胞形態(tài)結構的

2、改變;采用CCK8方法檢測兩藥單獨/聯合處理對胰腺癌PANC-1細胞的細胞毒性作用，并計算PANC-1細胞50％抑制濃度(IC50)以及兩藥聯合指數(CI);逆轉錄熒光定量聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測凋亡相關基因以及Hh信號通路關鍵分子（Gli1, Gli3, Smo）mRNA表達的變化;蛋白免疫印跡法(Western Blot)檢測凋亡相關蛋白(Bcl-2，Activated caspase-3，Activated caspas

3、e-8，Activated caspase-9)及Hh通路關鍵分子蛋白(Gli1，Smo，Ptc-1)表達的改變;細胞免疫熒光標記法(IF)檢測Gli1蛋白表達的變化。
　　結果: Hochest33258染色顯示，TSA、CYA均可明顯誘導胰腺癌PANC-1細胞凋亡，24h IC50分別為（0.51±0.07）μmol/L和（33.6±2.3）μmol/L，兩藥聯合指數為0.835，具有低度協(xié)同作用。TSA、CYA單獨/聯合干預

4、胰腺癌PANC-1細胞后，Bcl-2mRNA表達下降的同時上調Bax mRNA表達，兩者變化均以聯合組明顯;TSA0.5μmol/L干預可抑制Gli1 mRNA的表達，聯合CYA20μmol/L后對Hh通路的抑制效應進一步增強，降低Gli1、Smo mRNA表達量，上調Gli3 mRNA的表達。WesternBlot結果顯示，TSA0.5μmol/L、CYA20μmol/L單獨及聯合處理PANC-1后，凋亡相關蛋白Activated c

5、aspase-3，Activated caspase-8，Activated caspase-9的表達進一步上調，凋亡抑制因子Bcl-2的表達明顯下降，Hh信號關鍵分子蛋白Gli1、Smo、Ptc-1表達均下降，以聯合組最為明顯;細胞免疫熒光(IF)結果同樣顯示Gli1表達明顯下降，與Western Blot結果相符。
　　結論:
　　1.TSA及CYA均可誘導胰腺癌PANC-1細胞凋亡，具有濃度依賴性;兩藥聯合可協(xié)同促進P