納米銀-表皮生長(zhǎng)因子緩釋復(fù)合體的制備條件探討與結(jié)合率研究.pdf

1、目的：研究納米銀（Nano-silver）與表皮生長(zhǎng)因子（EGF）結(jié)合成復(fù)合體的最佳反應(yīng)條件及表皮生長(zhǎng)因子在不同濃度下與納米銀的結(jié)合率，為納米銀--表皮生長(zhǎng)因子復(fù)合體的制備提供依據(jù)。 方法與材料：先配制終濃度為200μg/ml的表皮生長(zhǎng)因子和濃度為5000ppm的納米銀溶液。在不同反應(yīng)條件下混合表皮生長(zhǎng)因子和納米銀溶液，并以超聲分散方法制備對(duì)應(yīng)的納米銀表皮生長(zhǎng)因子復(fù)合體（復(fù)合體中EGF終濃度為50μg/ml，納米銀終濃度為500

2、ppm），再分組進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)分為單純表皮生長(zhǎng)因子組、單純納米銀組、納米銀表皮生長(zhǎng)因子復(fù)合體組（簡(jiǎn)稱復(fù)合體組）、蒸餾水對(duì)照組。復(fù)合體組依據(jù)不同反應(yīng)條件分為不同亞組：①依pH值不同分為5.0、6.0、7.0和8.0四個(gè)亞組；②依反應(yīng)溫度不同分為4℃、25℃和37℃三組；③依反應(yīng)時(shí)間不同分為12小時(shí)、24小時(shí)和36小時(shí)三組。在上述各種反應(yīng)條件下對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行低溫高速離心（4℃，13000rpm）30分鐘，取上清液（反復(fù)離心至上清液澄清），將

3、上清液進(jìn)行Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（Tricine-SDS-PAGE電泳），再利用Image Quant350凝膠成像系統(tǒng)軟件對(duì)電泳結(jié)果進(jìn)行定量分析，從而得到各組上清液中EGF相對(duì)含量百分率，進(jìn)一步計(jì)算出不同反應(yīng)條件下表皮生長(zhǎng)因子與納米銀的結(jié)合率，并尋找兩者的最佳結(jié)合條件。然后在最佳反應(yīng)條件下，取濃度分別為50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml、150μg/ml的表皮生長(zhǎng)因子與500ppm的納米銀進(jìn)行復(fù)合，再

4、次利用Tricine-SDS-PAGE電泳及Image Quant350凝膠成像系統(tǒng)軟件分析觀察不同濃度的表皮生長(zhǎng)因子與固定濃度納米銀溶液的結(jié)合率，得出表皮生長(zhǎng)因子隨濃度變化與納米銀結(jié)合率的變化。 結(jié)果：Tricine-SDS-聚丙烯酰胺電泳實(shí)驗(yàn)中單純表皮生長(zhǎng)因子組和納米銀--表皮生長(zhǎng)因子復(fù)合體組有明顯條帶，單純納米銀組和蒸餾水對(duì)照組未見(jiàn)電泳條帶。pH值為5.0、6.0、7.0、8.0的反應(yīng)條件下制備的納米銀--表皮生長(zhǎng)因子復(fù)合

5、體的相對(duì)結(jié)合率分別為：17.39％±0.11％、16.09％±0.17％、28.32％±0.10％、19.36％±0.23％，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，不同pH值下表皮生長(zhǎng)因子與納米銀反應(yīng)的結(jié)合率有明顯差異；各pH值下復(fù)合體結(jié)合率兩兩比較P值均小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，pH值為7.0時(shí)的結(jié)合能力最強(qiáng)。溫度為4℃、25℃、37℃的反應(yīng)條件下制備的復(fù)合體的相對(duì)結(jié)合率分別為：23.20％±1.17％、15.51％±0.74％、29.89％±0.80％，

6、具有明顯差異；各反應(yīng)溫度下復(fù)合體結(jié)合率兩兩比較P值均小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，溫度為37℃時(shí)的結(jié)合率最高。反應(yīng)時(shí)間為12小時(shí)、24小時(shí)、36小時(shí)制備的復(fù)合體的相對(duì)結(jié)合率分別為：28.55％±0.15％、33.41％±0.24％、17.29％±0.19％，具有明顯差異；各反應(yīng)時(shí)間下復(fù)合體結(jié)合率兩兩比較P值均小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，反應(yīng)時(shí)間為24h時(shí)的結(jié)合率最高。在納米銀濃度為500ppm溶液中，表皮生長(zhǎng)因子的濃度為50μg/ml、7

7、5μg/ml、100μg/ml、150μg/ml時(shí)的相對(duì)結(jié)合率分別為：26.27％±0.58％、21.29％±0.47％、19.03％±0.59％、16.48％±0.24％，可見(jiàn)在濃度固定的納米銀溶液下，不同濃度表皮生長(zhǎng)因子與納米銀復(fù)合體的結(jié)合率具有明顯差異，不同濃度EGF條件下復(fù)合體結(jié)合率兩兩比較P值均小于0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表皮生長(zhǎng)因子與納米銀的結(jié)合率隨著表皮生長(zhǎng)因子的濃度升高逐漸下降，絕對(duì)結(jié)合量隨表皮生長(zhǎng)因子濃度升高而升高。