崗梅組培快繁技術(shù)研究.pdf

1、崗梅(Ilex asprella)，冬青科冬青屬植物，落葉灌木，具有較高的藥用和保健價值，可作為多種中成藥和涼茶的主要原料，具有廣闊的開發(fā)前景。本研究用崗梅當(dāng)年生帶腋芽莖段作外植體，進行外植體誘導(dǎo)、初代培養(yǎng)、繼代增殖、生根培養(yǎng)、煉苗移栽以及無菌苗莖段、葉片愈傷組織誘導(dǎo)和不定芽分化等研究，探索崗梅離體培養(yǎng)的高效途徑，建立一套崗梅組培快繁技術(shù)體系，為崗梅的開發(fā)應(yīng)用及其種苗的規(guī)模化繁殖提供技術(shù)支撐。主要研究結(jié)果如下:
　　1.外植體的最

2、佳取材時間和滅菌時間
　　采集崗梅當(dāng)年生帶腋芽莖段作外植體的最佳時間為8月份，用0.1％的升汞溶液滅菌8min，效果最佳，莖段腋芽萌動率達到76.13％，污染率較低，為33.33％。
　　2.莖段腋芽誘導(dǎo)分化和繼代增殖
　　通過對比試驗表明，優(yōu)化出誘導(dǎo)崗梅莖段腋芽分化的適宜培養(yǎng)基為:MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+GA30.2mg/L，培養(yǎng)40d，腋芽萌發(fā)率達到77.63％，新芽生長量達到1.57

3、 cm，長勢好，無玻璃化現(xiàn)象及異常愈傷組織產(chǎn)生;適宜叢芽繼代增殖的培養(yǎng)基為MS+6-BA0.8mg/L+IBA0.4mg/L，在1000～1500lx光照強度下培養(yǎng)30d，芽增殖倍數(shù)達到3.51，平均苗高3.61cm。
　　3.無菌苗葉片直接分化不定芽
　　剪取無菌苗葉片，用鑷子尖端刺穿無菌苗葉片5處，葉面向上接種在培養(yǎng)基WPM+6-BA3.0mg/L+NAA0.1mg/L中培養(yǎng)50d，葉片不經(jīng)過愈傷組織分化過程而直接分化出

4、不定芽，分化率達到98.88％，平均每片葉出芽數(shù)達到4.48株。
　　4.愈傷組織誘導(dǎo)及增殖分化
　　(1)剪取無菌苗葉片和莖段為外植體，接種在培養(yǎng)基MS+6-BA0.1 mg/L+NAA0.1mg/L和WPM+6-BA0.1 mg/L+2，4D0.5mg/L中培養(yǎng)60d均誘導(dǎo)脫分化形成愈傷組織，出愈率達到100％，愈傷組織質(zhì)量良好，為淺綠色、黃白色、致密顆粒狀。
　　(2)無菌苗葉片和莖段愈傷組織增殖最佳培養(yǎng)基為WP

5、M+6-BA1.0mg/L+NAA0.3mg/L。
　　(3)適宜無菌苗葉片愈傷組織再分化不定芽的培養(yǎng)基為WPM+6-BA3.0 mg/L+NAA0.3mg/L，接種培養(yǎng)60d，分化率達到76.67％，平均每塊愈傷組織出芽數(shù)為2.49株;莖段愈傷組織在培養(yǎng)基WPM+6-BA1.0mg/L+NAA0.3 mg/L中，再分化產(chǎn)生不定根，不定根分化率達到21.36％。
　　5.繼代壯苗及生根一次成苗
　　剪取繼代無菌苗叢，轉(zhuǎn)

6、接到培養(yǎng)基MS+6-BA0.6mg/L+IBA0.2mg/L中，50d開始出根，根從莖皮部長出，出根率達80.25％。
　　6.生根培養(yǎng)
　　適宜瓶內(nèi)生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.2mg/L+IBA1.0mg/L+ AC1000mg/L，生根率達98.79％，平均每株生根數(shù)4.55根。
　　7.煉苗移栽
　　崗梅生根組培苗在7000～10000 lx的自然光下，經(jīng)煉苗培養(yǎng)45d，移栽至基質(zhì)（黃心土∶細河沙∶泥