蝴蝶蘭組培外植體褐化影響因素的研究.pdf

1、蝴蝶蘭(Phalaenopsisspp.)是一種極富觀賞價(jià)值的名貴花卉，被譽(yù)為“洋蘭皇后”，組織培養(yǎng)為其主要的繁殖方式。褐化現(xiàn)象在其組培快繁過程中普遍存在，嚴(yán)重影響外植體分化，是制約蝴蝶蘭工廠化生產(chǎn)的難題。本研究以蝴蝶蘭無菌苗為材料，觀察其褐化前后的細(xì)胞結(jié)構(gòu)；定性定量分析褐化前后外植體內(nèi)的酚酸；測定不同處理外植體內(nèi)PPO活性和總酚含量，以期找到有效降低褐化的方法。主要研究結(jié)果如下： 1.光學(xué)顯微鏡觀察表明，褐變發(fā)生后，蝴蝶蘭外植

2、體細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，細(xì)胞壁有明顯的皺縮，有的地方斷裂較明顯，細(xì)胞中沉積大量的黑色顆粒狀物質(zhì)。 2.利用高效液相色譜儀，對蝴蝶蘭組培外植體褐化前后體內(nèi)的酚酸進(jìn)行定性定量分析，初步表明綠原酸、鄰苯二酚、兒茶酚、咖啡酸是與蝴蝶蘭(R4)褐化相關(guān)的酚酸，而起主要作用的則可能是鄰苯二酚和綠原酸。 3.培養(yǎng)基pH6.5或培養(yǎng)溫度20℃時(shí)蝴蝶蘭外植體褐化率最低。在培養(yǎng)溫度(25℃)相同時(shí)，PPO活性、總酚含量高低并不與pH值大小成正比，且

3、褐化率與PPO無顯著相關(guān)性，pH5.0時(shí)，褐化率與總酚含量顯著相關(guān)；在培養(yǎng)基pH(6.0)相同時(shí)，溫度越高，褐化率越高，PPO活性越強(qiáng)，總酚含量越高，且20℃時(shí)，褐化率與PPO、總酚含量分別達(dá)到極顯著、顯著相關(guān)，30℃時(shí)，褐化率與總酚含量顯著相關(guān)。 4.10001x和30001x光強(qiáng)下培養(yǎng)的蝴蝶蘭外植體褐化較輕，20001x光強(qiáng)培養(yǎng)的外植體褐化嚴(yán)重且PPO活性高于其他兩處理，差異顯著，三處理中褐化率與PPO活性均無顯著相關(guān)性；各

4、處理間總酚含量差異不顯著，10001x和20001x條件下培養(yǎng)的外植體褐化率與總酚含量顯著相關(guān)。黑暗預(yù)處理能減輕蝴蝶蘭組培外植體褐化，其中以預(yù)處理10d的褐化最輕；未經(jīng)暗處理的褐化最重且PPO活性最大，總酚含量無一致變化規(guī)律，各處理中褐化率與PPO活性顯著相關(guān)，預(yù)暗培養(yǎng)5天的外植體褐化率與總酚含量顯著相關(guān)。接種前對外植體遮光處理能有效減輕褐化，以雙層膜遮光效果好；各處理中褐化率與PPO活性均無顯著相關(guān)性，未遮光和雙層膜遮光的外植體褐化率