Ⅲ型前列腺炎患者精液和前列腺按摩液菌群結構多樣性研究.pdf

1、背景:慢性前列腺炎（Chronic Prostatitis Syndrome，CPS）是目前成年男性中一種常見疾病，是世界范圍內(nèi)僅次于糖尿病影響男性健康的重要疾病，并且發(fā)病率呈上升的趨勢。在我國泌尿外科門診病人中CP患者約占25％，超過一半的男性在一生中的某一些階段有過CPS的癥狀。CPS可引起尿頻、尿急、排尿困難、疼痛。CPS與性功能障礙、不育的相關性研究也日益引起重視。其中90％為Ⅲ型(ChronicProstatitis/Chro

2、nic plvic pain syndrome，CP/CPPS)。ⅢA（慢性前列腺炎）、ⅢB（慢性骨盆疼痛綜合癥）各近50％。常規(guī)細菌方法培養(yǎng)無細菌，臨床常用抗感染治療并且有效，提示該型前列腺組織可能同樣存在微生物。對Ⅲ型CPS患者前列腺按摩液(EPS)采用選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)細菌，68％發(fā)現(xiàn)凝固酶陰性球菌，19.1％發(fā)現(xiàn)L型細菌。但是，因為選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)費時費力，且條件限制，部分微生物難以培養(yǎng)，導致假陰性結果，影響了對該病的認識和臨床療

3、效。
　　分子生物學方法，如變性梯度凝膠電泳(denaturing gradient gel electrophoresis，DGGE)、高通量454測序技術，為研究健康男性以及Ⅲ型前列腺炎患者的前列腺微生態(tài)及菌群改變提供了嶄新的思路。有文獻報道在前列腺穿刺活檢組織中查尋前列腺中全部菌群，試圖找到關鍵引起CP/CPPS發(fā)生的關鍵病原菌。但作為有創(chuàng)性方法，前列腺穿刺活檢有適應證及取材的限制。而EPS和精液因取材方便，可多次取樣，易評

4、價療效。
　　因此本研究將聯(lián)合以上兩種分子生物學技術，研究Ⅲ型前列腺炎患者EPS和精液的微生態(tài)及菌群改變，作為創(chuàng)新點。
　　目的:基于16S rDNA基因V3區(qū)PCR-DGGE(變性梯度凝膠電泳)半定量檢測和高通量454二代測序技術，調(diào)查CP患者的前列腺按摩液和精液微生物群落結構的組成，探討CP與菌群變化的相關性，期望為Ⅲ型慢性前列腺炎進一步明確病因，為診斷和治療提供新的線索，從而針對性選擇治療措施，以達到改善療效、縮短療程

5、目的。
　　方法:研究的對象為Ⅲ型慢性前列腺炎患者和正常健康男性對照組各30例，用兩種方法檢測前列腺按摩液及精液標本:
　　1.基于16S rRNA的PCR-DGGE指紋圖譜分析精液和前列腺按摩液的微生物菌群多樣性變化;
　　2.基于高通量454二代測序技術研究精液和前列腺按摩液的微生物菌群組成結構及變化。
　　結果:1.DGGE譜和高通量454二代測序技術檢測結果一致。健康男性生殖道存在一個正常的微生物群落。每

6、個個體的前列腺按摩液與精液菌群有明顯同源條帶。在群落結構組成比例上，每個個體的精液和前列腺按摩液的菌群整體組成結構存在顯著差異;前列腺炎患者的前列腺按摩液與精液菌群組成的結構相似性均顯著低于正常健康對照組。
　　2.前列腺按摩液和精液的主要菌群的組成門類相似，主要由厚壁菌門(Firmicutes)、放線菌門(Actinobacteria)，擬桿菌門(Bacteroidetes)，變形桿菌門(Proteobacteria)，梭桿菌門

7、(Fusobacteria)，無壁菌門(Tenericutes)，藍細菌門(Cyanobacteria)，綠屈撓菌門(Chloroflexi)，和酸桿菌門(Acidobacteria)等構成。其組成除放線菌門和擬桿菌門外，其他優(yōu)勢菌在門的水平上均存在顯著差異（P＜0.05或P＜0.01）。例如厚壁菌門在EPS中占整個菌群組成的59.9％，而厚壁菌門在精液中雖然仍是主要優(yōu)勢菌群，但是僅占整個菌群的39.5％。，精液中以下細菌較EPS顯著增

8、加:變形桿菌門(19.23％ vs.7.2％)，梭桿菌門(4.04％vs.3.57％)，無壁菌門(2.28％vs.1.38％)，藍細菌門(3.28％vs.0.95％)，綠屈撓菌門(1.56％ vs.0.44％)。相反，與EPS相比，精液中放線菌門比例顯著降低(0.26％vs.0.66％)。
　　3.Ⅲ型前列腺炎患者的精液菌群組成與健康對照組存在顯著差異。在門的水平上，前列腺炎患者的精液中疣微菌門（Verrucomicro）和互養(yǎng)菌

9、門(Synergistetes)顯著高于正常健康對照組。
　　1.4.Ⅲ慢性前列腺患者的前列腺按摩液與健康對照組比較，在門的水平上，與精液的結果一致，疣微菌門顯著高于正常健康對照組，并且僅在在慢性前列腺炎患者中可以檢出，益生菌乳酸桿菌(Lactobacillus)的相對豐度顯著降低。
　　結論:本研究首次對男性精液和前列腺按摩液的微生物菌落進行了全面分析，發(fā)現(xiàn)其組成遠比以往認識的豐富;
　　1.每個個體的精液、前列腺按

10、摩液存在共有菌，但整體上二者菌群組成存在明顯差異，提示在菌群組成結構上，精囊液與前列腺液可能存在不同;
　　2.Ⅲ前列腺炎患者的精液菌群結構較健康男性發(fā)生了顯著變化，疣微菌門(Verrucomicro)和互養(yǎng)菌門（Synergistetes）顯著高于正常健康對照組;
　　3.Ⅲ前列腺炎患者的前列腺按摩液菌群雖然變化不顯著，但同樣檢測出疣微菌門（Verrucomicro）菌，值得動物實驗進一步研究其作用。
　　4.Ⅲ前列