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文檔簡介
1、背景及目的: 在四種類型的前列腺炎中,只有Ⅲ型前列腺炎迄今為止病因不清,是臨床上最常見的前列腺炎。雖然人們對Ⅲ型前列腺炎患者前列腺液(expressed prostatic secretion,EPS)進(jìn)行了常規(guī)檢查、細(xì)菌培養(yǎng),仍未能發(fā)現(xiàn)致病菌,故治療困難。為此人們針對感染以外的病因進(jìn)行了大量的探索,提出了多種假說,但均不能完全解釋該病發(fā)生的臨床特點(diǎn)。因此,積極探索Ⅲ型前列腺炎的病因?qū)χ笇?dǎo)臨床工作具有重要意義。 臨床上在
2、Ⅲ型前列腺炎患者中常觀察到下列現(xiàn)象:患者EPS中存在炎癥或炎癥標(biāo)記物陽性;抗感染治療時(shí)常有效。這啟示其中可能有不被常規(guī)檢查發(fā)現(xiàn)的感染因素存在。另外,Ⅲ型前列腺炎患者前列腺中常發(fā)現(xiàn)結(jié)石。這種前列腺結(jié)石是在前列腺腺泡和腺管內(nèi)形成的真性結(jié)石,它形成的原因也不清楚。在其形成的過程中是否也有不為我們認(rèn)知的感染性病因存在同樣值得我們探索。 新發(fā)現(xiàn)的納米細(xì)菌(Nanobacteria,NB)及其獨(dú)特的生理和致病特點(diǎn)為闡明Ⅲ型前列腺炎和前列腺結(jié)
3、石的病因提供了一條嶄新的思路。 NB是新發(fā)現(xiàn)的納米級球菌,在普通的微生物培養(yǎng)條件下不能生長,只能在細(xì)胞培養(yǎng)基上生長。常規(guī)方法不能檢測,具有礦化的特性。它能感染人體內(nèi)多種細(xì)胞,一方面釋放毒素引起組織炎癥,同時(shí)也能導(dǎo)致被感染細(xì)胞發(fā)生骨骼外鈣化(病理性鈣化)。已有實(shí)驗(yàn)證實(shí)它能在動物膽囊和腎臟內(nèi)引起形成結(jié)石。目前臨床上已有人從Ⅲ型前列腺炎患者的EPS和前列腺結(jié)石中分離、培養(yǎng)出了NB??筃B治療后患者臨床癥狀明顯減輕,前列腺內(nèi)的結(jié)石變小
4、甚至消失。因此推斷NB可能是Ⅲ型前列腺炎和前列腺結(jié)石的一個(gè)重要病因。以上研究為Ⅲ型前列腺炎和前列腺結(jié)石發(fā)生機(jī)制研究提供了全新的切入點(diǎn),但未見有更深入的實(shí)驗(yàn)來驗(yàn)證。據(jù)此,我們首先擬用Ⅲ型前列腺炎患者的EPS和前列腺結(jié)石進(jìn)行NB的分離、培養(yǎng),進(jìn)一步證實(shí)其中是否存在NB及其感染的情況。其次用培養(yǎng)的NB感染動物前列腺,觀察其中的病理變化,驗(yàn)證NB在Ⅲ型前列腺炎和前列腺結(jié)石發(fā)生中可能的病因?qū)W作用。最后和動物大腸桿菌及盆腔淤血性慢性前列腺炎進(jìn)行比較
5、,尋找它們致病的異同點(diǎn),為臨床診治工作提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法: 1.本研究擬從Ⅲ型前列腺炎患者的EPS和前列腺結(jié)石中分離培養(yǎng)NB,并采用間接免疫熒光、鈣染色、電鏡觀察、16s rRNA基因擴(kuò)增及測序等方法對培養(yǎng)物進(jìn)行鑒定。 2.選用成年雄性SD大鼠為實(shí)驗(yàn)對象,建立動物模型,分為不同實(shí)驗(yàn)組。對照組由SD大鼠尿道逆行注入生理鹽水于前列腺尿道部,模型組和治療組則分別注入NB,造成大鼠前列腺感染。4周后分別處死部分對照和模
6、型組SD大鼠,觀察前列腺組織的病理變化。同時(shí)稱取大鼠體重、前列腺重量,檢測組織中白細(xì)胞、卵磷脂小體及相關(guān)的細(xì)胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-6)變化。其余動物繼續(xù)喂養(yǎng)。治療組4周后予四環(huán)素抗NB治療4周。第8周后將所有動物處死,進(jìn)行相同的檢測。另外,將所有實(shí)驗(yàn)大鼠前列腺組織處理后進(jìn)行再分離培養(yǎng),觀察有無NB生長。 3.制作SD大鼠NB、大腸桿菌感染及慢性盆腔淤血慢性前列腺炎模型,分別在4周、8周時(shí)進(jìn)行病理觀察,組織中白細(xì)胞
7、、卵磷脂小體及相關(guān)的細(xì)胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-6)檢測。 結(jié)果: 1.單抗間接免疫熒光染色對NB進(jìn)行鑒定,55例Ⅲ型前列腺炎患者中26例EPS標(biāo)本存在NB感染,感染的陽性率為48.3%。40例正常對照組中有2例存在NB,陽性率為5%。二組比較有明顯差異(P<0.01)。30例結(jié)石標(biāo)本中,有17例存在NB,陽性率為56.7%。 2.電鏡下觀察,NB呈球狀或球棒狀,大小約100~500nm,絕大多數(shù)聚集
8、成簇,菌體周圍有一層黑色的物質(zhì)包繞,并有羥基磷灰石分布。 3.茜素紅染色觀察結(jié)果:細(xì)菌絕大多數(shù)聚集成簇,個(gè)體極其微小。 4.特異性片段的測序結(jié)果經(jīng)軟件與NB的16SrRNA序列進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)相似度為98%。 5.NB感染4周后,SD大鼠前列腺呈慢性炎癥改變。8周后感染持續(xù)存在,組織明顯纖維化,且掃描電鏡下發(fā)現(xiàn)前列腺內(nèi)有結(jié)石形成。治療組中前列腺慢性炎癥明顯減輕,未見結(jié)石。對照組無變化。 6.NB感染4周、8
9、周后,各組大鼠體重?zé)o明顯差異。但模型組前列腺重量、組織中白細(xì)胞、卵磷脂小體數(shù)量及相關(guān)的細(xì)胞因子(TqqF-α、IL-1β、IL-6)與對照組比較均有明顯差異(P<0.05)??垢腥局委?周后,治療組與模型組比較,以上各項(xiàng)指標(biāo)均有明顯差異(P<0.05),與對照組比較無差異。 7.NB感染的模型組動物前列腺組織再培養(yǎng)均有NB生長,對照組中無NB生長。 8.4周后大腸桿菌組和NB組大鼠前列腺均呈慢性炎癥改變,但NB組較大腸桿
10、菌組稍輕,盆腔靜脈淤血組炎癥不明顯。8周后三組均呈明顯慢性炎癥改變,掃描電鏡檢查僅在納米細(xì)菌感染的前列腺中發(fā)現(xiàn)結(jié)石,其余三組中均未發(fā)現(xiàn)結(jié)石。 9.經(jīng)過不同的處理,4周、8周后,各組大鼠體重?zé)o明顯差異。4周后,大腸桿菌組和NB組與盆腔靜脈淤血組和對照組比較,前列腺重量及卵磷脂小體明顯減少,組織中白細(xì)胞及相關(guān)的細(xì)胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)水平明顯升高,差異顯著(P<0.05)。8周后,大腸桿菌組、NB組和盆腔靜脈淤血
11、組三組間上述觀察指標(biāo)均無差異;同對照組比較,前列腺重量及卵磷脂小體明顯減少,EPS中白細(xì)胞及相關(guān)的細(xì)胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)水平明顯升高,差異顯著(P<0.05)。 結(jié)論及展望: 1.Ⅲ型前列腺炎患者EPS和前列腺結(jié)石中存在NB,并且有較高的陽性率。NB感染與Ⅲ型前列腺炎和結(jié)石的發(fā)生存在著密切的關(guān)系。 2.NB感染能引起大鼠前列腺慢性炎癥。四環(huán)素抗感染治療,能明顯減輕前列腺的慢性炎癥。
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