人類(lèi)原發(fā)性胃癌相關(guān)染色體基因掃描分析.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文人類(lèi)原發(fā)性胃癌相關(guān)染色體基因掃描分析姓名：于景翠申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：孫開(kāi)來(lái)20040401本文在前期比較基因組雜交(comparativegenomiehyhridization，CGH)研究基礎(chǔ)上采用微衛(wèi)星DNA多態(tài)標(biāo)記對(duì)17、18號(hào)染色體進(jìn)行基因組掃描，確定與胃癌發(fā)生相關(guān)的染色體區(qū)帶，尋找胃癌相關(guān)的已知基因或未知基因，將胃癌發(fā)生相關(guān)基因定位在染色體最小范圍內(nèi)，為胃癌相關(guān)的腫瘤抑制基因定位、

2、克隆提供線(xiàn)索。方法45例原發(fā)性胃癌及癌旁正常組織來(lái)自哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一、第二和第三臨床醫(yī)學(xué)院住院病人的手術(shù)樣本，取材前患者均未接受放療和化療。并經(jīng)過(guò)病理學(xué)檢驗(yàn)證實(shí)其組織類(lèi)型，取材后樣本置于一80。C凍存。1基因組DNA提取應(yīng)用GIBCOLDNAzol提取試劑，提取腫瘤及相應(yīng)的癌旁正常組織基因組DNA，用PharmaeiaDNA／RNAcalculator測(cè)定濃度及純度。2第一批引物選擇、標(biāo)記、PCR反應(yīng)體系選取用FAM(藍(lán))、HEX

3、(綠)、NED(黃)三種顏色熒光染料標(biāo)記的29對(duì)引物(panel23、panel24，美國(guó)ABI公司產(chǎn)品)，其中包括覆蓋17號(hào)染色體的15個(gè)位點(diǎn)(7個(gè)位點(diǎn)分布在17p，8個(gè)位點(diǎn)分布在17q，平均雜合度076，平均間距8cM)，覆蓋18號(hào)染色體的14個(gè)位點(diǎn)(5個(gè)位點(diǎn)分布在18p，9個(gè)位點(diǎn)分布在18q，平均雜合度077，平均間距9cM)對(duì)45例原發(fā)性胃癌通過(guò)低密度微衛(wèi)星位點(diǎn)掃描進(jìn)行雜合性缺失分析。采用多重PCR方法，將4～15對(duì)引物放在同一

4、反應(yīng)體系內(nèi)，總反應(yīng)體系5一中包括：10xPCR緩沖液05v1，25mmol／LMgCl2061xl，10mmol／LdNTPs01一，Qsolution1止，5U／止HotStarTaq“DNAPolymerase004Ixl，引物004∥對(duì)，模板DNA50ngo3第二批引物選擇、標(biāo)記、PCR反應(yīng)體系在分析第一批引物得到的雜合性缺失結(jié)果基礎(chǔ)之上，我們又分別選擇了17號(hào)染色體3個(gè)重疊缺失區(qū)內(nèi)36個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)(http：／／tesesrch