小鼠竇房結(jié)組織與心房肌、心室肌組織MicroRNA表達(dá)譜差異研究.pdf

1、目的:對(duì)昆明小鼠竇房結(jié)、心房肌、心室肌組織中的MicroRNAs表達(dá)譜差異進(jìn)行對(duì)比研究。
　　方法:1.竇房結(jié)、心房肌、心室肌取材預(yù)實(shí)驗(yàn),確保解剖定位準(zhǔn)確:選取10只出生60-90天體重為35-45g之間健康昆明小鼠,不拘雌雄,麻醉后按解剖定位取下竇房結(jié)組織,左心耳組織,心室肌組織進(jìn)行石蠟包埋后連續(xù)切片,層厚約2μm,將切下組織進(jìn)行HE染色后光學(xué)顯微鏡下觀察,確定取材部位準(zhǔn)確無(wú)誤后,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)取材。2.取材:選取180只出生60-9

2、0天體重為35-45g之間健康昆明小鼠,不拘雌雄,分兩次取材,每次取材90只,每只分別對(duì)竇房結(jié)、心房肌、心室肌組織取材。采用經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)修正和確認(rèn)的解剖定位方法進(jìn)行竇房結(jié)取材,心房肌及心室肌取材分別為左心耳和心尖部。本實(shí)驗(yàn)采用解剖定位取材,并將對(duì)所取竇房結(jié)組織進(jìn)行鑒定。3.MicroRNAs表達(dá)譜差異檢測(cè):將批量取材組織分類標(biāo)記后送檢進(jìn)行總RNA提取,經(jīng)檢測(cè)所提RNA質(zhì)量后與MicroRNA芯片雜交,芯片經(jīng)熒光圖像掃描后進(jìn)行數(shù)據(jù)篩選出特異性

3、MicroRNAs。
　　結(jié)果:1.取樣組織進(jìn)行切片HE染色結(jié)果顯示:其中9只小鼠竇房結(jié)組織取材完整,另1只小鼠取材含大部分竇房結(jié)組織,所取竇房結(jié)組織細(xì)胞胞質(zhì)淡染,少量細(xì)胞聚集,細(xì)胞核大而圓,呈中心性分布,無(wú)橫紋,周圍較多纖維結(jié)締組織包繞,其間可見竇房結(jié)動(dòng)脈。2.小鼠竇房結(jié)解剖定位是以界嵴為縱軸線,上腔靜脈與右心房交界處1.5×2×1mm3范圍。3.MicroRNA芯片檢測(cè)結(jié)果顯示:竇房結(jié)組織較左心室、左心房組織中mir-214,

4、mir-147,mir-1900等12種microRNAs表達(dá)明顯(超過(guò)2倍)上調(diào),表達(dá)顯著(超過(guò)2倍)下調(diào)的有mir-654、mir-3968、mir-467b、mir-3081、mir-142、mir-1894、mir-497、mir-5114、mir-346、mir-3096a等27種MicroRNAs。
　　結(jié)論:1.小鼠解剖定位方法能準(zhǔn)確獲取竇房結(jié)組織。2.竇房結(jié)、心房肌、心室肌組織的MicroRNAs表達(dá)譜檢測(cè)方法科學(xué)