轉WAM1擬南芥對小菜蛾生長發(fā)育及腸道菌群的影響.pdf

1、小菜蛾腸道菌群在其生長發(fā)育過程中扮演者重要的角色。本研究通過將來自于尤金袋鼠(Macropus eugenii)的抗菌肽基因WAM1導入擬南芥中，研究其對小菜蛾生長發(fā)育及其腸道菌群的影響，取得如下成果:
　　通過人工合成WAM1基因，并優(yōu)化其密碼子為擬南芥偏愛的，將其與植物表達載體pSR784d連接，構建重組植物表達載體WAM1-pSR784d，并遺傳轉化根癌農桿菌LBA4404。通過花絮侵染法遺傳轉化擬南芥，經過除草劑Basta

2、初步篩選獲得6株表現(xiàn)型為陽性的植株。
　　PCR檢測，6個株系中均可檢測出WAM1基因條帶，初步確定為轉基因陽性植株，分別命名為WAM1-A、B、C、D、E、F;RT-PCR檢測，WAM1基因在6個擬南芥株系中均表達，其中WAM1-C表達量最高，并且極顯著高于其他株系。
　　生測實驗表明，取食WAM1-C的小菜蛾的第四齡期極顯著長于取食其他株系的小菜蛾，在蛹期和成蟲期各處理之間無顯著差異;取食轉WAM1擬南芥的小菜蛾均降低重

3、，其中取食WAM1-C的小菜蛾達到極顯著水平，蛹重無顯著差異。通過對小菜蛾腸道菌群的16S rDNA測序表明，小菜蛾腸道菌群優(yōu)勢菌為厚壁菌門和變形菌門，取食野生型擬南芥與轉入空載pSR784d其腸道菌群結構在門和科級水平均類似，說明未攜帶目的基因的T-DNA片段不對小菜蛾腸道菌群產生影響，取食WAM1-C的小菜蛾的腸道菌群在門的分類水平上差異較小，但在科的分類水平上差異較大，其中腸桿菌科的豐度由48.67％降到38.93％，黃單胞菌科的