兩種常用中草藥多成分快速分析方法的研究.pdf

1、中草藥以多成分作為物質(zhì)基礎(chǔ)發(fā)揮藥效作用，多成分的快速、準(zhǔn)確、靈敏的分析檢測技術(shù)和方法是中草藥成分分析和質(zhì)量評價的有力手段。 RRLC(RapidResolutionLiquidChromatography)為一種新型的高分離度快速液相色譜技術(shù)，具有高分離度、高靈敏度和快速的特點，在復(fù)雜基質(zhì)及多成分分析研究中體現(xiàn)出了較大的優(yōu)勢。本文第一部分采用RRLC分析技術(shù)，研究建立了2種常用中草藥指紋圖譜及主要成分定量測定的分析方法。

2、 烏頭類藥材在中國和一些東亞國家的民間用藥中應(yīng)用十分廣泛。目前因服用烏頭類藥材而導(dǎo)致的中毒事件仍頻繁發(fā)生。雙酯型生物堿，如新烏頭堿、烏頭堿、次烏頭堿等是烏頭類藥材中的劇毒成分，同時也是藥效成分，該類成分的治療窗很窄。如何快速、準(zhǔn)確的評價和控制烏頭類藥材的質(zhì)量，對于其安全用藥至關(guān)重要。在第一部分的第二章，研究和建立RRLC方法用于烏頭類藥材的指紋圖譜分析，并采用此方法同時測定各烏頭藥材中新烏頭堿、烏頭堿、次烏頭堿的含量。該方法分析條件為：

3、ZorbaxExtendC18色譜柱，流動相組成為甲醇-0.26％醋酸氨體系，梯度洗脫，RRLC方法分析每個樣品的時間僅需10min，比傳統(tǒng)的HPLC方法的分析時間縮短了約6倍。采用RRLC-DAD/MS技術(shù)對烏頭類藥材指紋圖譜中的11個主要成分進行了指認(rèn)。新烏頭堿的線性范圍為4.93—492.50μg/mL，烏頭堿的線性范圍為5.18—517.50μg/mL，次烏頭堿的線性范圍為4.93—492.50μg/mL；四種生物堿的日內(nèi)精密度

4、的RSD在0.80-1.91％之間，日間精密度的RSD在0.19—4.93％之間；重復(fù)性的RSD小于2.19％；日內(nèi)及日間穩(wěn)定性的RSD分別小于3.23％、3.08％；回收率在98.37—101.50％之間，符合對上述三個生物堿的定量分析要求。因此，本文所建立的RRLC方法準(zhǔn)確、快速、簡便，既可以對大批量的烏頭類藥材進行常規(guī)的多成分指紋圖譜分析，又可以同時對主要成分進行定量分析，為烏頭類藥材的質(zhì)量評價提供參考信息。 黃連為常用中

5、藥，傳統(tǒng)的種植方式采用砍林搭建人工棚遮蔭栽培黃連，消耗的木材量大，造成森林毀壞、水土流失；目前已經(jīng)逐漸采用生態(tài)技術(shù)栽培黃連，包括林藥間作、藥藥間作、糧藥間作等生態(tài)技術(shù)新模式，提高了經(jīng)濟效益，也保護了生態(tài)環(huán)境。在第一部分的第三章，應(yīng)用RRLC技術(shù)，研究和建立了靈敏度高、專屬性好的RRLC-UV方法，用于評價不同種植條件、不同產(chǎn)地、不同炮制方法得到的黃連樣品的質(zhì)量，該方法不僅對四個主要生物堿(藥根堿、黃連堿、巴馬汀、小檗堿)進行含量測定，還

6、能夠同時進行黃連中多成分的指紋圖譜分析。該方法分析條件為：ZorbaxEclipsePlusC8色譜柱，流動相組成為乙腈—20mmol/LKH2PO4體系，梯度洗脫，每個樣品的分析時間僅需3.5min，比傳統(tǒng)的HPLC方法的分析時間縮短了近7倍。藥根堿的線性范圍為4.75—47.50μg/mL，黃連堿的線性范圍為20.60-164.80μg/mL，巴馬汀的線性范圍為18.07—180.73μg/mL，小檗堿的線性范圍為89.70-717

7、.57μg/mL；4種生物堿的日內(nèi)及日間精密度的RSD分別在0.4—1.5％及0.3—3.7％之間；重復(fù)性的RSD在0.6—1.2％之間；日內(nèi)及日間穩(wěn)定性RSD分別在0.4-0.5％及0.4—1.3％之間；回收率在96.30-104.10％之間，RSD小于3.3％，符合對上述四個生物堿的定量分析要求。藥根堿、黃連堿、巴馬汀、小檗堿的最低檢測限分別為0.19ng．0.21ng、0.15ng．0.14ng，最低定量限分別為57ng，0.82

8、ng，0.55ng，and0.27ng。方法準(zhǔn)確、快速、簡便，適用于黃連藥材的日常質(zhì)量控制。 中藥中的寡糖和多糖的藥效作用越來越受到關(guān)注，寡糖分子量分布及多糖的單糖組成研究是評價其質(zhì)量、提供理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)基本信息的重要內(nèi)容，在本論文的第二部分第一章建立了毛細(xì)管凝膠電泳—激光誘導(dǎo)熒光法分析測定了疏血通注射液糖蛋白中N—連接寡糖鏈的分子量分布。首先用肽糖苷酶F(PNgase—F)釋放出疏血通糖蛋白中N—端連接的寡糖，采用熒光試劑AP

9、TS標(biāo)記后，以毛細(xì)管凝膠電泳—激光誘導(dǎo)熒光檢測法(HPCE—LIF)分離和檢測寡糖衍生物。分析條件為：eCAPTMN—CHO中性涂層毛細(xì)管柱，分離介質(zhì)為糖分離凝膠緩沖液，翻轉(zhuǎn)電極，負(fù)極壓力進樣，正極檢測，采用LIF檢測器，激發(fā)波長488nm，接收波長520nm。寡糖衍生物按分子量由小到大的順序出峰，通過與1—20個聚合度的葡聚糖衍生物電泳梯度圖譜的比較，測得疏血通糖蛋白中N—連接寡糖鏈單糖、二聚葡萄糖、三聚葡萄糖、四聚葡萄糖。該方法是一

10、種分析寡糖分子量分布的準(zhǔn)確、有效的方法。 第二部分第二章建立了一種1—苯基—3—甲基—5—吡唑啉酮(PMP)柱前衍生化HPLC同時測定5種中性糖(葡萄糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖、木糖)、2種糖醛酸(葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸)的方法。PMP衍生物不易裂解，沒有立體異構(gòu)體，沒有副產(chǎn)物產(chǎn)生。分析條件：采用常規(guī)的C18色譜柱，梯度洗脫，DAD檢測器240nm波長檢測，幾種單糖的PMP衍生物得到了很好的分離。用此方法對人工栽培的蛹蟲草中多糖