枇杷品種（系）和“大五星”后代群體的RAPD分析.pdf

1、本試驗利用RAPD技術(shù)對四川種植的8個枇杷品種(系)進(jìn)行了品種鑒定和系譜分析；對兩個大五星枇杷后代群體的60份個體材料進(jìn)行了遺傳多樣性分析，結(jié)果表明： 1.采用CTAB法成功地提取了68份枇杷個體的DNA樣品，檢測DNA完整，OD260/OD280的比值在1.80左右，不必去除RNA就能用于RAPD分析，符合RAPD的要求。 2.從80個引物中篩選出能穩(wěn)定擴增的引物6個。 3.通過篩選優(yōu)化了更加適宜枇杷的RAPD

2、擴增體系：2.5μl10×PCRbuffer，2.5μlMg2+，0.25μlTaq酶，0.5μldNTP，2.5μl隨機引物，15.75μlddH2O，1μl模板DNA。 4.得到RAPD擴增的反應(yīng)程序如下：94℃預(yù)變性5min，94℃變性1min，38℃退火1min，72℃延伸1min，40次循環(huán)，最后一次為72℃延伸5min，4℃保存。 5.采用RAPD分析，利用選出的能穩(wěn)定擴增的6個引物對大五星、龍泉1號、川農(nóng)1

3、號等8個枇杷品種(系)進(jìn)行了擴增，共擴增出54條帶，26條具有多態(tài)性，多態(tài)性比例占48.15％。其中“早鐘6號”與“解放鐘”的遺傳距離最小，只有0.040，相似系數(shù)達(dá)到96.0％；“川農(nóng)1號”與“早鐘6號”的遺傳距離最大為0.217，相似系數(shù)為78.3％。 6.利用篩選的6個引物初步建立了大五星、龍泉1號、川農(nóng)1號等品種(系)的DNA指紋圖譜，并找到部分特異譜帶。 7.利用特異譜帶結(jié)合DNA指紋圖譜，成功地對參試的8個品

4、種(系)進(jìn)行了鑒別，并利用NTSYSpc2.1軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，得到8個品種(系)間的遺傳距離及聚類分析結(jié)果。 8.采用RAPD分析，利用篩選出的6個引物對兩個枇杷群體的60個個體進(jìn)行遺傳多樣性研究，共擴增出104條帶，平均每個引物擴增17.33條帶，其中多態(tài)性帶70條，多態(tài)性比例為67.31％，遺傳多樣性豐富。 9.分別研究了兩個群體的遺傳多樣性：對群體1進(jìn)行PCR擴增，擴增出92條帶，平均每個引物擴增15.33條帶，