免疫磁性微球制備方法及其應(yīng)用研究.pdf_第1頁(yè)
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1、免疫磁性微球作為新型的功能材料近年來(lái)已被廣泛研究,其巨大的應(yīng)用潛力特別是在生物醫(yī)學(xué)、生物工程等領(lǐng)域的應(yīng)用引起了各國(guó)研究者的高度重視.該研究以免疫磁性微球作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,探討了不同材料的磁性微球載體的制備方法,并進(jìn)行了其在免疫檢測(cè)和分離純化方面的應(yīng)用.該研究采用反相懸浮交聯(lián)法、反向懸浮包埋法、種子聚合法和無(wú)乳化劑乳液聚合法分別制備了聚乙烯醇、纖維素和瓊脂糖、聚苯乙烯、以及聚苯乙烯-丙烯酰胺5種磁性微球.確立磁性微球的最佳活化條件,并對(duì)包括制

2、備成本、磁響應(yīng)性、磁滲漏性、機(jī)械強(qiáng)度以及蛋白偶聯(lián)量等方面性能進(jìn)行了考察.選擇了制備簡(jiǎn)單、物理吸附性能好的聚苯乙烯磁性微球作為免疫磁性捕獲-ELISA的載體;選擇了磁響應(yīng)性、機(jī)械強(qiáng)度和蛋白偶聯(lián)量等綜合性能較好的纖維素磁性微球作為免疫磁性分離的載體.將兔Anti-GRP IgG抗體致敏聚苯乙烯磁性微球,結(jié)合生物素標(biāo)記抗體和酶標(biāo)親和素建立免疫磁性捕獲-ELISA(IMS-ELISA)法,并用于中藥制劑中甘草特異性蛋白(GRP)的檢測(cè),與ELI

3、SA法相比較該方法甘草蛋白檢測(cè)準(zhǔn)確率為100﹪,其靈敏度可達(dá)10ng/mL.利用兔Anti-BX IgG制備松材線蟲(chóng)檢測(cè)用聚苯乙烯免疫磁性微球,建立IMS-ELISA法,并用于疫木中松材線蟲(chóng)抗原的檢測(cè).結(jié)果表明雖然該方法對(duì)擬松材線蟲(chóng)也存在一定的交叉反應(yīng)性,但疫木中松材線蟲(chóng)抗原總檢出率為94.1﹪,其靈敏度可以達(dá)到0.1μg/mL線蟲(chóng)蛋白抗原.采用纖維素免疫磁性微球?qū)w裂解液中的IFNα-2b進(jìn)行一步免疫磁性分離,經(jīng)純化條件的優(yōu)化,其平

4、均活性收率可達(dá)到88﹪(c.v.=4.6﹪),平均比活性可達(dá)到1.5×10<'8>IU/mg(c.v.=6.7﹪),并顯示了良好的重現(xiàn)性.經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳分析,純度大于99﹪,純化樣品符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(1.0×10<'8>IU/mg,純度>95﹪).研究結(jié)果表明,該實(shí)驗(yàn)制備的聚苯乙烯和纖維素免疫磁性微球分別適用于復(fù)雜樣品中抗原成分的鑒定和高純度目的蛋白的分離純化,具備操作簡(jiǎn)單、快速、方便等特點(diǎn),結(jié)果令人滿意.免疫磁性微球的應(yīng)用為免

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