經(jīng)腹股溝管輸精管結(jié)扎對兔睪丸、附睪和輸精管的組織學(xué)影響.pdf

1、研究背景與目的： 輸精管結(jié)扎是一種安全、可靠的男性節(jié)育方法，已在全世界開展30多年，實施了約1億例<'[1]>，在我國己實施近5千萬例<'[2]>，但自上世紀90年代以來，我國男性絕育術(shù)開展呈明顯下降趨勢<'[3]>。有兩個主要因素影響其開展，一是并發(fā)癥，二是絕育的不可逆性。輸精管結(jié)扎的并發(fā)癥主要是陰囊血腫、附睪郁積、痛性精子肉芽腫等。不過，隨著顯微外科技術(shù)以及試管嬰兒技術(shù)的發(fā)展，人們越來越關(guān)心輸精管結(jié)扎對睪丸內(nèi)精子發(fā)生的影響，

2、精子的數(shù)量和精液的質(zhì)量直接關(guān)系到輸精管吻合術(shù)后生育能力的恢復(fù)和人工授精的成功率。 在既往研究中，我們采用經(jīng)陰囊進行兔輸精管結(jié)扎的手術(shù)方式，無論開放性還是閉合性輸精管結(jié)扎均引起了較大程度的精子發(fā)生損害<'[4,5]>。我們推測，輸精管結(jié)扎術(shù)后對精子發(fā)生的影響，可能與輸精管結(jié)扎的部位--結(jié)扎處離輸精管附睪端的距離以及結(jié)扎術(shù)局部的手術(shù)創(chuàng)傷有關(guān)。因此，本研究采用一種離輸精管附睪端較遠因此對睪丸局部影響小的輸精管結(jié)扎術(shù)--經(jīng)腹股溝管輸精管

3、結(jié)扎術(shù)，通過與以前的經(jīng)陰囊輸精管結(jié)扎術(shù)進行對比，探討這種手術(shù)方式是否可以減輕手術(shù)局部的創(chuàng)傷和術(shù)后早期(10天、3月)對精子發(fā)生等的影響。 方法： 1、實驗方案： 實驗1：正常雄性日本大耳白兔30只，4月齡，隨機分為3組：①對照組--不作任何處理。②經(jīng)腹股溝管單側(cè)閉合性輸精管結(jié)扎組(笪-單-閉)--經(jīng)腹正中線切口，打開兩側(cè)腹股溝管，挑出輸精管，左側(cè)或右側(cè)(交替確定)輸精管結(jié)扎--切除一段輸精管并結(jié)扎兩側(cè)斷端；對側(cè)作

4、假手術(shù)(除沒剪斷并結(jié)扎輸精管外，其余步驟均同結(jié)扎側(cè))。③經(jīng)陰囊單側(cè)閉合性輸精管結(jié)扎組(囊-單-閉)--經(jīng)陰囊切口暴露睪丸、附睪、輸精管，左側(cè)或右側(cè)(交替確定)輸精管結(jié)扎--切除一段輸精管并結(jié)扎兩側(cè)斷端，近附睪端結(jié)扎處距離附睪尾約1cm；對側(cè)作假手術(shù)。術(shù)后10天取材：對照組的動物選一側(cè)(左側(cè)或右側(cè)，交替確定)取材，其余組的動物均取兩側(cè)的睪丸、附睪和輸精管。 實驗2：6月齡正常雄性日本大耳白兔32只，隨機分為2組：①經(jīng)腹股溝管單側(cè)閉

5、合性輸精管結(jié)扎組(管-單-閉)--左側(cè)或右側(cè)(交替確定)結(jié)扎，對側(cè)假手術(shù)；②經(jīng)腹股溝管單側(cè)近端開放性輸精管結(jié)扎組(管-單-開)--左側(cè)或右側(cè)(交替確定)結(jié)扎，對側(cè)假手術(shù)。笪-單-開組的結(jié)扎術(shù)同管-單-閉組，但近附睪端輸精管斷端保持開放，另一斷端的輸精管才結(jié)扎。術(shù)后10天從各組隨機抽選5只動物取材，其余的動物術(shù)后3月取材；取材包括雙側(cè)的睪丸、附睪和輸精管。 2．組織處理 取下的睪丸、附睪和輸精管用Bouin液浸潤固定約48

6、小時，然后從睪丸、附睪和輸精管各隨機切取1～3個組織塊，用羥乙基甲基丙烯酸樹脂包埋，切25μm厚的樹脂切片，睪丸用PAS和蘇木精染色，附睪、輸精管用蘇木精染色。 3．觀察與測量 術(shù)后取材時肉眼觀察睪丸、附睪的形態(tài)及其與周圍組織的粘連情況；光鏡下觀察睪丸、附睪和輸精管的組織學(xué)結(jié)構(gòu)；用體視學(xué)方法測量睪丸內(nèi)生精小管的直徑和體積，附睪內(nèi)的附睪管和精子團等的體積，輸精管內(nèi)精子團等的體積分數(shù)(比例)。 4．統(tǒng)計檢驗

7、同組動物結(jié)扎側(cè)與(對側(cè))假手術(shù)側(cè)的形態(tài)定量指標(biāo)的比較，采用配對f檢驗，以P≤0.05表示有顯著性差異。 結(jié)果： 1．解剖觀察： 術(shù)后10天，管-單-閉或管-單-開組的睪丸、附睪形態(tài)正常，與周圍組織無粘連，近附睪端輸精管結(jié)扎處或近附睪端輸精管斷口處距附睪尾約5～8cm。囊-單-閉組的睪丸、附睪與周圍組織粘連，且部分器官變形。 術(shù)后3月，管-單-閉組或管-單-開組結(jié)扎側(cè)的附睪尾和輸精管高度腫脹，腫脹的輸精管呈

8、乳白色，約占附睪尾至結(jié)扎處或開放處的輸精管長度的3/5。 2．睪丸組織學(xué)： 精子發(fā)生損害的主要特征是：生精小管萎縮，直徑變小，生精上皮變薄，生精細胞脫落、數(shù)量減少且出現(xiàn)退化細胞和多核細胞。 術(shù)后10天，管單一閉組結(jié)扎側(cè)和假手術(shù)側(cè)各有1/7個睪丸的精子發(fā)生受到嚴重損害，兩側(cè)的睪丸體積或生精小管平均直徑無顯著性差異。囊-單-閉組結(jié)扎側(cè)和假手術(shù)側(cè)各有3/8個睪丸的精子發(fā)生受到嚴重損害，另2/8個睪丸的精子發(fā)生受到輕度損

9、害，兩側(cè)的睪丸體積或生精小管平均直徑無顯著性差異。管-單-開組結(jié)扎側(cè)(所有4個睪丸)和假手術(shù)側(cè)(所有5個睪丸)精子發(fā)生均未受到嚴重損害，兩側(cè)的睪丸體積或生精小管平均直徑無顯著性差異。 術(shù)后3月，管-單-閉組或管-單-開組結(jié)扎側(cè)和假手術(shù)側(cè)睪丸的精子發(fā)生均未受到嚴重損害，兩側(cè)的睪丸體積或生精小管平均直徑無顯著性差異。 3．附睪組織學(xué)： 結(jié)扎對附睪的影響主要表現(xiàn)在：結(jié)扎側(cè)附睪管的擴張和精子在附睪管內(nèi)郁積。 術(shù)后

10、10天，管-單-閉組結(jié)扎側(cè)附睪內(nèi)精子團的總體積、尾部附睪管或尾部精子團的體積與假手術(shù)側(cè)相比有增加趨勢，增加43％-62％，但差異無顯著性。囊-單-閉組結(jié)扎側(cè)尾部附睪管或尾部附睪管腔的體積與假手術(shù)側(cè)相比均有顯著性增加，增加38％-73％；附睪總體積或附睪內(nèi)精子團的總體積與假手術(shù)側(cè)相比有增加趨勢，增加13％-95％，但差異無顯著性。管-單-開組結(jié)扎側(cè)附睪尾的體積或尾部附睪管的體積與假手術(shù)側(cè)相比似有減小趨勢(減少21％-24％)，而精子團的總

11、體積或尾部精子團的體積似有增加趨勢(增加14％-17％)，但差異均無顯著性。 術(shù)后3月，管-單-閉組和管-單-開組的結(jié)扎側(cè)均出現(xiàn)附睪管的高度擴張和精子郁積。結(jié)扎側(cè)附睪或附睪尾的體積、附睪內(nèi)精子團的總體積以及附睪尾內(nèi)附睪管、附睪管管腔、精子團的體積均顯著增加到假手術(shù)側(cè)1.64～3.87倍(管-單-閉組)或1.43～2.61倍(管-單-開組)。 4、輸精管組織學(xué)： 輸精管結(jié)扎對輸精管的影響主要表現(xiàn)在結(jié)扎側(cè)輸精管的擴張

12、和精子郁積。 術(shù)后10天，管-單-閉組或管-單-開組結(jié)扎側(cè)輸精管的管徑，輸精管內(nèi)上皮層及管腔的體積分數(shù)或輸精管內(nèi)精子團的體積分數(shù)，與假手術(shù)側(cè)相比均無顯著性差異。 術(shù)后3月，管-單-閉組或管-單-開組均有結(jié)扎近端輸精管的高度擴張和精子郁積。結(jié)扎側(cè)的輸精管內(nèi)上皮層及管腔的體積分數(shù)和精子團的體積分數(shù)分別顯著增加到假手術(shù)側(cè)的2.52、4.28倍(管-單-閉組)或2.06、3.60倍(管-單-開組)。 結(jié)論： 1．

13、該研究顯示，①經(jīng)腹股溝管的輸精管結(jié)扎，不引起睪丸、附睪、輸精管與周圍組織的粘連。②經(jīng)腹股溝管的開放性(共4個睪丸)及閉合性(6/7個睪丸)輸精管結(jié)扎術(shù)后10天，睪丸的精子發(fā)生未見明顯損害。本文研究和我們既往的研究顯示，經(jīng)陰囊的近附睪端輸精管結(jié)扎術(shù)后10天均引起睪丸與周圍組織的粘連，閉合性(見于4/12<'[5]>、3/8個睪丸)及開放性(所有12個睪丸<'[5]>)結(jié)扎術(shù)后10天引起了嚴重的精子發(fā)生損害。這有力的說明，輸精管結(jié)扎術(shù)后早期

14、對精子發(fā)生的損害與手術(shù)創(chuàng)傷或睪丸周圍的炎癥刺激有關(guān)。 2．該研究顯示，經(jīng)腹股溝管的閉合性及開放性輸精管結(jié)扎術(shù)后3月，附睪尾、輸精管腫脹，附睪管及輸精管內(nèi)精子郁積，但睪丸內(nèi)的精子發(fā)生未見明顯損害。我們既往的研究<'[5,6]>顯示，經(jīng)陰囊的近附睪端輸精管閉合性結(jié)扎術(shù)后3月，約有一半的睪丸有嚴重的精子發(fā)生損害。經(jīng)陰囊的近附睪端閉合性輸精管結(jié)扎后，睪丸產(chǎn)生的精子不能貯存于擴張性好的兔輸精管，附睪內(nèi)貯存的精子也很有限<'[5,6]>；而