加味烏梅丸治療潰瘍性結(jié)腸炎免疫機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、潰瘍性結(jié)腸炎(UC)又稱慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎，是原因未明的直腸和結(jié)腸慢性炎性疾病。病變主要累及黏膜及黏膜下層，以潰瘍形成為病理改變的特征。臨床主要表現(xiàn)為腹瀉、黏液膿血便、腹痛和里急后重。過去認(rèn)為，該病在歐美多見，亞非少見，因而對其重視不夠。但近十幾年的研究表明，UC在我國也是一種較常見的消化道疾病。潰瘍性結(jié)腸炎起病緩慢，病程遷延，反復(fù)發(fā)作，病程長者，存在癌變的可能，給患者的生活工作帶來諸多負(fù)面影響，嚴(yán)重降低了患者的生活質(zhì)量。世界衛(wèi)生

2、組織已將本病確認(rèn)為現(xiàn)代難治性疾病之一。 目前，臨床常用氨基水楊酸類和糖皮質(zhì)激素類藥物治療UC，但存在易復(fù)發(fā)和一定程度的不良反應(yīng)等問題。中醫(yī)藥治療UC，在辨證論治、整體調(diào)節(jié)方面有其獨(dú)特的理論基礎(chǔ)和豐富的臨床實(shí)踐優(yōu)勢，具有良好的研究價值。古典經(jīng)方--烏梅丸是治療久瀉久利的有效方劑，其治療UC有著豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)。加味烏梅丸是在中醫(yī)理論的指導(dǎo)下，在臨床經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，結(jié)合現(xiàn)代科研成果，組成的科研處方。本課題以加味烏梅丸為研究對象，旨在研究

3、其對TNBS型潰瘍性結(jié)腸炎大鼠的保護(hù)作用，探討其治療的免疫學(xué)機(jī)制。本論文包括以下幾個方面： 文獻(xiàn)綜述: 上篇主要通過查閱、整理國內(nèi)外潰瘍性結(jié)腸炎的相關(guān)資料，從中醫(yī)和西醫(yī)兩個方面對其進(jìn)行系統(tǒng)論述。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究概況中，對UC的病因、發(fā)病機(jī)制和臨床治療進(jìn)行了綜述。尤其是對目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)比較公認(rèn)的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制進(jìn)行了重點(diǎn)闡述。在中醫(yī)學(xué)研究概況中，對中醫(yī)學(xué)關(guān)于UC的病名歸屬，病因病機(jī)及治療現(xiàn)狀進(jìn)行了綜述。 研究內(nèi)容:

4、 1.處方研究在中醫(yī)理論的指導(dǎo)下，以臨床經(jīng)驗(yàn)為基礎(chǔ)，結(jié)合現(xiàn)代科研成果，組成處方加味烏梅丸。根據(jù)中醫(yī)理論對該處方進(jìn)行方解分析，將其功效定為益氣健脾，澀腸止瀉，調(diào)和寒熱，活血止痛。該方可用于脾虛日久，寒熱錯雜，瘀血阻滯引起的腹痛，腹瀉，里急后重，黏液膿血便。同時，本部分還對處方中諸藥的藥理進(jìn)行綜述，結(jié)合現(xiàn)代研究進(jìn)展，進(jìn)一步全面分析該處方。 2.加味烏梅丸對TNBS型大鼠潰瘍性結(jié)腸炎保護(hù)作用的研究 2.1加味烏梅丸對TNBS

5、型結(jié)腸炎大鼠疾病活動指數(shù)(DAI)的影響 選取SD雄性大鼠，隨機(jī)分為6組，即正常對照組，模型組，SASP組，加味烏梅丸高、中、低劑量組。正常對照組采用生理鹽水灌腸，其余各組均以TNBS/乙醇灌腸，復(fù)制潰瘍性結(jié)腸炎模型。造模后第二天開始灌胃給藥，正常對照組和模型組給予蒸餾水灌胃，SASP組給藥量為0.5g/kg(相當(dāng)于成人用藥量的7倍)，加味烏梅丸高、中、低劑量組給藥量分別為22.17g生藥/kg 體重、11.08g生藥/kg體重

6、、5.54g生藥/kg 體重(相當(dāng)于成人用藥量的14倍、7倍、3.5倍)，1.0ml/100g體重，1次/日，連續(xù)14天。每日稱量體重，記錄腹瀉及大便性狀，用于評價DAI。說明本實(shí)驗(yàn)所復(fù)制的模型成功，同時也說明加味烏梅丸能夠改善UC的癥狀，阻止?jié)冃越Y(jié)腸炎的進(jìn)一步發(fā)展，使TNBS型UC大鼠的損傷程度減輕，從而起到保護(hù)UC大鼠的作用。 2.2加味烏梅丸對TNBS型結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織病理形態(tài)學(xué)的影響 給藥后第15天取材，觀察

7、結(jié)腸長度、最大寬度、黏膜損傷指數(shù)及組織學(xué)評分的變化。進(jìn)一步證實(shí)了本實(shí)驗(yàn)所復(fù)制的模型成功，驗(yàn)證了TNBS/乙醇模型的可靠性。結(jié)合病理形態(tài)學(xué)的改變，認(rèn)為加味烏梅丸可通過減輕結(jié)腸炎癥，促進(jìn)結(jié)腸黏膜修復(fù)，恢復(fù)結(jié)腸分泌功能，從而起到治療UC的作用。 2.3加味烏梅丸對TNBS型結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織中MPO含量的影響 給藥后第15天取材，剪取病變結(jié)腸組織，液氮保存，用于測量MPO含量。表明加味烏梅丸高、中劑量組能有效抑制炎性細(xì)胞浸潤，

8、減輕結(jié)腸炎癥反應(yīng)，而低劑量組則不能很好的抑制炎癥。 3.加味烏梅丸治療潰瘍性結(jié)腸炎的免疫學(xué)機(jī)理研究 3.1加味烏梅丸對TNBS型結(jié)腸炎大鼠血清中IL-6含量的影響給藥后第15天，腹主動脈取血，采用雙抗夾心ABC-ELISA法檢測血清中IL-6的含量。表明加味烏梅丸可通過下調(diào)IL-6，阻斷其活性，抑制其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，起到治療UC的作用，且其下調(diào)作用受劑量影響。 3.2加味烏梅丸對TNBS型結(jié)腸炎大鼠血清中TNF-

9、α含量的影響采用雙抗夾心ABC-ELISA法檢測血清中TNW-α的含量。提示加味烏梅丸可通過下調(diào)TNF-α而起到治療UC的作用。 3.3加味烏梅丸對TNBS型結(jié)腸炎大鼠淋巴細(xì)胞凋亡的影響 采用Tunel法觀察結(jié)腸黏膜固有層淋巴細(xì)胞凋亡的變化。表明加味烏梅丸可能是通過促進(jìn)淋巴細(xì)胞凋亡，而起到治療UC的作用。 3.4加味烏梅丸對TNBS型結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織NF-кB的影響 采用免疫組化法觀察結(jié)腸組織NF-кB

10、的變化。提示，加味烏梅丸可能是通過抑制NF-кBp65的激活起到治療UC的作用。 結(jié)論: 綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論，認(rèn)為加味烏梅丸治療潰瘍性結(jié)腸炎與降低IL-6和TNF-α的水平，促進(jìn)固有層淋巴細(xì)胞凋亡，抑制腸組織NF-кB的表有關(guān)。結(jié)合各指標(biāo)的特性、功能及研究進(jìn)展，進(jìn)一步認(rèn)為加味烏梅丸可能通過抑制TNF-α的產(chǎn)生而抑制NF-кB的激活，繼而使IL-6及TNF-α的表達(dá)降低，通過對NF-кB和TNF-α的調(diào)節(jié)，促進(jìn)腸黏膜固