番茄四個(gè)抗病基因的基因標(biāo)記的創(chuàng)建與輔助選擇.pdf

1、番茄是世界廣泛種植的蔬菜作物之一,其獨(dú)特的風(fēng)味、豐富的營(yíng)養(yǎng)、鮮艷的色彩和特殊的醫(yī)用價(jià)值吸引著越來越多的消費(fèi)者,培育優(yōu)良的抗病品種是防治各種番茄病害最為有效的方法。本研究的目的:利用生物信息學(xué)手段,找到抗病基因與其等位基因的核苷酸差異位點(diǎn),通過設(shè)計(jì)等位基因特異引物,開發(fā)出抗病基因的標(biāo)記用于基因標(biāo)記輔助選擇。為番茄抗病品種的選育提供新的材料,加快番茄抗病品種選育的進(jìn)程。本研究獲得的主要結(jié)果如下:
　　 1.從GenBank中獲得抗病

2、基因Tm-2α、Cf-9,I-2、Mi-1以及等位基因的序列信息,通過生物信息學(xué)軟件分析,找到番茄抗病基因Tm-2α,Cf-9、I-2上SNPs共24個(gè)；分析了Mi-1基因等位序列與附近RGA的gDNA序列,找到了它們?cè)诘谝粋€(gè)內(nèi)含子結(jié)構(gòu)的核苷酸差異。
　　 2.分別根據(jù)抗病基因Tm-2α、Cf-9、I-2的SNPs位點(diǎn)設(shè)計(jì)基因特異引物3對(duì),引物3’端與模板互補(bǔ)或錯(cuò)配,并人為的在3’端的第二或第三位引入錯(cuò)配堿基。Mi-1基因特異引

3、物是根據(jù)第一個(gè)內(nèi)含子兩側(cè)翼的序列進(jìn)行設(shè)計(jì),擴(kuò)增抗病基因與等位序列的第一個(gè)內(nèi)含子區(qū)域。
　　 3.采用摩擦接種法和灌根法對(duì)抗病材料和敏感材料進(jìn)行TMV和南方根接線蟲接種鑒定,同時(shí)分別以Tm-2α和Mi-1特異引物對(duì)這些材料進(jìn)行PCR擴(kuò)增。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明,TMV與南方根接線蟲接種結(jié)果與PCR擴(kuò)增結(jié)果完全吻合。
　　 4.以Cf-9特異引物對(duì)國(guó)際通用的葉霉病生理小種鑒別寄主進(jìn)行PCR檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果顯示僅Ont7719(Cf-9/

4、Cf-9)能擴(kuò)增出條帶。以I-2特異引物對(duì)抗枯萎病品系LA3847(NCHS-1)、LA4026(Florida7481)和敏感品系A(chǔ)53作PCR檢測(cè),試驗(yàn)結(jié)果表明,LA3847、LA4026均能擴(kuò)增出600bp大小的帶,而A53擴(kuò)增出大小為720bp左右的條帶。這說明Tm-2α、Cf-9、I-2、Mi-1特異引物均能用于田間基因標(biāo)記輔助選擇。
　　 5.本研究以國(guó)外多抗F1品種為材料,連續(xù)多代自交,在F3、F4苗期采用基因標(biāo)記