丙酮酸鈉與PD-2液腹腔復蘇對失血性休克大鼠腸粘膜屏障功能保護作用的實驗研究.pdf

1、目的：比較丙酮酸鈉與PD-2液腹腔復蘇對失血性休克大鼠腸粘膜屏障的保護作用，從血清學、形態(tài)學及蛋白質(zhì)水平探討丙酮酸鈉腹腔復蘇對失血性休克大鼠腸粘膜屏障功能的保護作用及其在腹腔復蘇中的優(yōu)勢。
　　 方法：健康清潔級雄性SD大鼠，40只，隨機分為4組：假手術(shù)組(對照組)、失血性休克模型組(休克組)，復方氯化鈉(林格氏液)靜脈復蘇+PD-2液腹腔復蘇組(PD-2液組)，復方氯化鈉(林格氏液)靜脈復蘇+丙酮酸鈉腹腔復蘇組(丙酮酸鈉組)，

2、每組10只。對照組依次行右頸總動脈、右股靜脈、左股動脈插管及全身肝素化。休克組在對照組基礎(chǔ)上經(jīng)左股動脈放血，制備失血性休克大鼠模型。PD-2液組、丙酮酸鈉組在休克組基礎(chǔ)上經(jīng)右股靜脈復蘇，復蘇液體為放出的血量及2倍量的林格氏液。同時分別向腹腔內(nèi)注入20ml2.5％PD-2液與20ml丙酮酸鈉。對照組大鼠插管后2h取材(動脈血與小腸標本)待測；休克組大鼠造模后1h取材；PD-2液組、丙酮酸鈉組大鼠復蘇后1h取材。保持大鼠自由通暢呼吸，用烤燈

3、維持大鼠體溫在37±0.3℃。在實驗設(shè)計時間取左股動脈血，以自動血氣分析系統(tǒng)測定動脈血氣(pH、PaCO2、PaO2)。采用分光光度法測定血漿D-乳酸(D-lactic acid，D-LA)含量，光鏡下觀察各組大鼠小腸粘膜組織形態(tài)改變。用免疫印跡法和免疫組織化學方法測定小腸粘膜上皮磷酸化血管擴張刺激磷蛋白(p-VASP)及下游緊密連接結(jié)構(gòu)蛋白ZO-1的表達情況。
　　 結(jié)果：血氣分析結(jié)果：休克組pH及PaO2水平較對照組明顯降低

4、，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，PaCO2降低，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；PD-2液組、丙酮酸鈉組較休克組pH水平及PaO2含量明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，PCO2升高，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，與PD-2液組比較，丙酮酸鈉組pH水平及PO2水平升高更為明顯，二組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；PCO2變化差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。D-LA含量結(jié)果：較對照組比較，休克組D-LA含量明顯升高

5、，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；PD-2液組、丙酮酸鈉組較休克組明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；與PD-2液組比較，丙酮酸鈉組D-LA降低更明顯，二組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。光鏡下對照組大鼠小腸粘膜層絨毛排列整齊，無水腫，粘膜下血管充盈。休克組大鼠小腸粘膜層絨毛高度水腫，粘膜下血管塌陷，固有層內(nèi)腺體灶性區(qū)域壞死，并大片粘膜絨毛壞死、脫落，缺損；PD-2液組和丙酮酸鈉組小腸粘膜破壞較休克組明顯減輕，見小腸粘膜層

6、絨毛輕度水腫、少量片狀壞死、脫落，粘膜下血管輕度塌陷；丙酮酸鈉組大鼠小腸粘膜絨毛水腫、倒伏及壞死程度均好于PD-2液組，粘膜下血管較充盈。小腸上皮損傷指數(shù)評分：丙酮酸鈉組高于休克組及PD-2液組(P<0.01 or P<0.05)。蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果顯示休克組、PD-2液組、丙酮酸鈉組大鼠小腸粘膜Z0.1蛋白水平較對照組低(P<0.01)，p-VASP蛋白水平均較對照組高(P<0.01)；與休克組相比較，PD-2液組、丙酮酸鈉組大鼠小腸

7、粘膜ZO-1蛋白含量均增高(P<0.01)，p-VASP蛋白含量均降低(P<0.01)，其中丙酮酸鈉組小腸粘膜ZO-1蛋白含量增高更明顯(P<0.05)，p-VASP蛋白表達降低更明顯(P<0.05)；而丙酮酸鈉組與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。免疫組化結(jié)果顯示各組結(jié)果與免疫印跡基本一致。
　　 結(jié)論：
　　 1.靜脈復蘇加腹腔復蘇可顯著降低失血性休克大鼠血漿D-LA含量，增加PO2水平，有助于糾正酸中毒，