腎綜合征出血熱病毒基因序列分析與分子流行病學(xué)研究.pdf

1、山東大學(xué)碩士學(xué)位論文腎綜合征出血熱病毒基因序列分析與分子流行病學(xué)研究姓名：宋紹霞申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學(xué)指導(dǎo)教師：王志玉畢振強(qiáng)20050512山東大學(xué)碩士掌位論文腎綜合征出血熱病毒基因序列分析與分子流行病學(xué)研究研究生：宋紹霞導(dǎo)師：王志玉教授畢振強(qiáng)主任醫(yī)師中文摘要目的從山東省嚙齒類等動物中鑒定漢坦病毒(HV)，陽性標(biāo)本進(jìn)行RT—PCR擴(kuò)增，測定序列，與以往山東省Hv病毒株一起進(jìn)行序列分析和分子流行病學(xué)研究。了解它們的同源

2、性和遺傳距離，掌握山東省不同地區(qū)腎綜合征出血熱(HFRS)的分布特征，遺傳規(guī)律，進(jìn)化關(guān)系；找出山東省的代表株，克隆其M基因。為從根本上預(yù)防和控制HFRS在山東省的流行打下堅實基礎(chǔ)并為研制HFRS特異診斷試劑和新型疫苗提供科學(xué)依據(jù)。，方法采集山東省不同地區(qū)的鼠肺標(biāo)本，應(yīng)用間接免疫熒光法(IFA)鑒定出HV感染的陽性標(biāo)本。根據(jù)GenBankIIVM基因保守序列及相關(guān)參考文獻(xiàn)應(yīng)用Primer5軟件設(shè)計HTN與SEO型通用引物及將HTN型(I型

3、)和SEO型(II型)分型的型特異性引物。通過RTPCR法擴(kuò)增陽性標(biāo)本中FlYM片段部分基因，測序并用DNASTAR軟件進(jìn)行同源序列比較并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹。觀察山東省IIV堿基變異情況，找出山東省的代表株，進(jìn)行全M片段擴(kuò)增并構(gòu)建克隆載體。測序并用BLAST軟件進(jìn)行同源序列比較，觀察核苷酸以及所推導(dǎo)的氨基酸變異情況；利用SignalP、DNASTAR和TmPred軟件預(yù)測其信號肽序列、疏水區(qū)、抗原區(qū)及跨膜區(qū)，分析氨基酸變異對HV包膜糖蛋白生