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文檔簡介
1、瘋草是可產(chǎn)生苦馬豆素而引起草食動物出現(xiàn)典型神經(jīng)學(xué)癥狀和病理學(xué)變化的有毒植物的統(tǒng)稱,主要為棘豆屬(Oxytropis)和黃芪屬(Astragalus)植物中的部分種,是中國和美國最主要的毒草類群,每年導(dǎo)致大量家畜中毒死亡,造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。瘋草中苦馬豆素的含量與其內(nèi)生真菌(Alternaria spp.sect.Undifilum)含量呈正相關(guān)。已查明瘋草內(nèi)生真菌的菌絲在種子和植株體內(nèi)生活,但如何完成生活史尚不明確。為此,本論文以采集自
2、內(nèi)蒙古阿拉善左旗、寧夏海原縣和甘肅天??h的小花棘豆(O.glabra)、黃花棘豆(O.ochrocephala)、和甘肅棘豆(O.kansuensis)的植株和種子為試驗材料,研究了在瘋草各個生長時期內(nèi)生真菌的生活方式及其聯(lián)系,得到如下結(jié)果:
1、瘋草越冬期內(nèi)生真菌的生活方式:采用OmtssuF/OmtssuR和OR1/ITS5對特異性引物檢測10株黃花棘豆返青后的主根和幼莖,分別有40%和80%的主根中有內(nèi)生真菌,50%和9
3、0%的幼莖中有內(nèi)生真菌,2種檢測中各有一株(不同植株)根部無內(nèi)生真菌但幼莖中有內(nèi)生真菌,其余根部帶菌者幼莖均帶菌,第二對引物對帶菌植株的檢出率(90%)高于第一對引物(50%),但雜帶多,而后者無雜帶。根部的條帶比幼莖的條帶明亮,說明根中菌絲量多于幼莖,菌絲體在植株根部越冬,返青后擴(kuò)展至地上部分。
2、瘋草生長期內(nèi)生真菌的生活方式:在3種棘豆屬瘋草的拔節(jié)期、開花期和成熟期,植株表面均可檢測出內(nèi)生真菌的分生孢子,其中以白色衰老的
4、花托上分生孢子最多,其次為干枯的葉片,在莖上極少。說明內(nèi)生真菌在瘋草的整個生長期均可產(chǎn)生分生孢子,且僅產(chǎn)生在衰老或死亡的組織上。
3、瘋草種子內(nèi)外的內(nèi)生真菌:黃花棘豆種子表面粘附內(nèi)生真菌的孢子,種子經(jīng)清洗后測定每粒上的分生孢子數(shù)為32.78個。小花棘豆、黃花棘豆和甘肅棘豆種子內(nèi)有內(nèi)生真菌的比例分別為80.00%、85.83%和8.75%,菌絲體均分布于種皮與胚交接處(糊粉層),而種皮和胚中無菌絲體。
4、瘋草內(nèi)生真菌
5、從種子到幼苗的生長過程:種子播種出苗后采用內(nèi)生真菌特異性引物OmtssuF/OmtssuR檢測出內(nèi)生真菌,而剝?nèi)シN皮的胚發(fā)育的苗中無內(nèi)生真菌。說明內(nèi)生真菌的菌絲體在種子萌發(fā)和幼苗生長時進(jìn)入幼苗。
5、瘋草內(nèi)生真菌的孢子侵入幼苗:將黃花棘豆葉片表面內(nèi)生真菌的分生孢子接種于黃花棘豆的離體葉片上可見孢子萌發(fā)出芽管,并侵入葉片。
6、不同瘋草中內(nèi)生真菌的異同:基于ITS序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹表明3種瘋草中的內(nèi)生真菌的菌株(LY
6、Z0091、LYZ0093和LYZ0109)均為同一種棘豆鏈格孢(Alternaria oxytropis),在pH4~11條件下均可生長,最適生長溫度分別為20℃、25℃和25℃,僅LYZ0109在30℃下停止生長,小花棘豆和甘肅棘豆內(nèi)生真菌的菌絲扭曲狀,厚垣孢子少,而黃花棘豆的內(nèi)生真菌則無扭曲狀菌絲,大量成串的厚垣孢子由基質(zhì)底部向上呈樹狀生長。在8個酸堿度梯度、7個溫度和8種培養(yǎng)基培養(yǎng)4周均未產(chǎn)生分生孢子。菌株兩兩對峙培養(yǎng)出現(xiàn)排斥,
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