沉香內生真菌的初步研究.pdf

1、內生真菌(Endophyticfungi)是一大類未被充分研究的真菌。近年來的研究表明，幾乎所有植物中都存在內生真菌，他們主要生長在植物的根、莖、葉等器官的表皮下的組織當中。它泛指那些生活在健康的植物體內不引起任何病害癥狀的所有真菌，植物內生真菌長期生活在穩(wěn)定的植物微生態(tài)系統(tǒng)中，和宿主建立了共生或半共生關系。研究表明已分離出的大多數植物內生真菌能夠產生與其宿主相同或相似的活性成分。 白木香樹的莖干在刀砍、蟲蛀、病腐后被真菌感染，

2、木質部的薄壁細胞中儲存的物質產生一系列化學變化，最后形成樹脂，即為沉香。為了找出含有樹脂的木材，必須砍倒樹干才能找出含有沉香樹脂的個體，導致大量白木香樹遭人砍伐，嚴重影響了白木香族群的生存。同時，沉香的高價也導致了白木香在多個沉香產地國被非法砍伐及貿易。因此，從沉香木塊中分離沉香內生真菌研究人工結香具有重要的意義。 本論文通過優(yōu)化內生真菌的分離條件，從沉香木塊中分離純化出9株沉香內生真菌，然后通過芐基丙酮耐受性、人工結香材料分析

3、等方法篩選出4株內生真菌具有促進結香作用；對該4株內生真菌進行分子生物學種屬鑒定、人工結香條件實驗和紅褐肉座菌搖瓶發(fā)酵實驗。實驗結果概括如下： 1、沉香內生真菌分離條件優(yōu)化實驗中，采用次氯酸鈉(5％有效氯)作為表面消毒劑處理效果較好，選擇次氯酸鈉(5％有效氯)消毒合適的時間為4min，最適分離培養(yǎng)溫度是26℃。共分離純化出9株沉香內生真菌，經初步鑒定分屬2亞門、5目、5科、5屬。 2、對沉香揮發(fā)油提取方法進行方法學研究，

4、選擇索氏提取無水乙醚回流法結合GC-MS分析沉香揮發(fā)油成分組成。 3、沉香內生真菌的篩選實驗中，先后通過芐基丙酮耐受性篩選、人工結香樣品變色部分的寬度和燃燒香味篩選，最后篩選出Aq-2、Aq-3、Aq-5b、Aq-7等4株內生真菌。 4、沉香內生真菌的分子生物學種屬鑒定，鑒定結果為：Aq-2為蒂腐色二孢(Botryosphaeriarhodina)，Aq-3為紅褐肉座菌(Hypocreajecorina)，Aq-5b里氏

5、木霉(Trichodermareesei)，Aq-7為康氏木霉(Trichodermakoningii)。 5、對4株沉香內生真菌蒂腐色二孢、紅褐肉座菌、里氏木霉、康氏木霉按照封口方式、打孔位置、接菌方式、結香時間等方案進行人工結香條件研究。最適結香條件：采用棉塞和木塞作為封口方式；選擇樹干自基部50～100cm之間的區(qū)域作為結香位置；采用蒂腐色二孢菌株單菌結香和褐肉座菌、里氏木霉、康氏木霉3株木霉屬內生真菌混菌結香，其次是里氏