基質(zhì)金屬蛋白酶在肝癌細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移中的作用研究.pdf

1、目的：研究基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)在肝細(xì)胞性肝癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)和肝癌細(xì)胞株Hep-G2、SMMC-7721及MHCC-97H中的表達(dá)情況以及與肝癌細(xì)胞侵襲力的關(guān)系，探討MMPs在肝細(xì)胞性肝癌侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用。 方法： 1.免疫組織化學(xué)法檢測(cè)23例肝癌組織標(biāo)本中MMP-2、MMP-9及MMP-15蛋白的表達(dá)水平。 2.

2、RT-PCR檢測(cè)肝癌細(xì)胞株Hep-G2、SMMC-7721及MHCC-97H中MMPmRNA表達(dá)，系統(tǒng)研究14種不同基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-1、-2、-3、-8、-9、-10、-12、-13、-14、-15、-16、-17、-19、-20)的表達(dá)及分布格局。 3.采用Transwell及特異性單克隆抗體阻斷技術(shù)，探討基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2、MMP-15)對(duì)Hep-G2、SMMC-7721及MHCC-97H侵襲力的影響。

3、 結(jié)果： 一、免疫組織化學(xué)法檢測(cè)MMP-2、MMP-9及MMF-15在肝癌組織中的表達(dá) 1.MMP-2在肝癌組織中的表達(dá)：23例肝癌病理標(biāo)本中，17例顯示MMP-2陽(yáng)性，占樣本的73.4％。 2.MMP-9在肝癌組織中的表達(dá)：23例肝癌病理標(biāo)本中，21例顯示MMP-9陽(yáng)性，占樣本的91.09％。 3.MMP-15在肝癌組織中的表達(dá)：23例肝癌病理標(biāo)本中，15例顯示MMP-15陽(yáng)性，占樣本的65.2％。

4、 二、RT-PCR檢測(cè)肝癌細(xì)胞株Hep-G2、SMMC-7721及MHCC-97H中MMPmRNA的表達(dá)及分布 1.MMP-1、-2、-3、-8、-9、-10、-12、-13、-14、-15、-16、-17、-19、-20mRNA在肝癌細(xì)胞株Hep-G2中的表達(dá)：Hep-G2細(xì)胞表達(dá)MMP-1、-2、-3、-10、-13、-15、-17、-19，其中MMP-1、-2、-13、-17、-19表達(dá)水平較高。 2.MMP

5、-1、-2、-3、-8、-9、-10、-12、-13、-14、-15、-16、-17、-19、-20mRNA在肝癌細(xì)胞株SMMC-7721中的表達(dá)：SMMC-7721細(xì)胞表達(dá)MMP-2、-14、-15、-17、-19，其中MMP-17及MMP-19表達(dá)水平較高。 3.MMP-1、-2、-3、-8、-9、-10、-12、-13、-14、-15、-16、-17、-19、-20mRNA在肝癌細(xì)胞株MHCC-97H中的表達(dá)：MHCC-9

6、7H細(xì)胞表達(dá)MMP-1、-2、-14、-15、-17、-19，其中MMP-1及MMP-2表達(dá)水平較高。 三、細(xì)胞體外侵襲能力分析及抗體阻斷實(shí)驗(yàn) 1.細(xì)胞Hep-G2體外侵襲能力分析及抗體阻斷實(shí)驗(yàn)顯示：Hep-G2在體外的侵襲力平均為20±13個(gè)細(xì)胞每視野。但經(jīng)MMP-2及MMP-15特異性單克隆抗體阻斷后，其侵襲能力受到完全抑制，視野中見不到發(fā)生侵襲的Hep-G2細(xì)胞。 2.細(xì)胞SMMC-7721體外侵襲能力分析

7、及抗體阻斷實(shí)驗(yàn)顯示：SMMC-7721在體外的侵襲力平均為28±19個(gè)細(xì)胞每視野。但經(jīng)MMP-2及MMP-15特異性單克隆抗體阻斷后，其侵襲能力受到完全抑制，視野中見不到發(fā)生侵襲的SMMC-7721細(xì)胞。 3.細(xì)胞MHCC-97H體外侵襲能力分析及抗體阻斷實(shí)驗(yàn)顯示：MHCC-97H在體外的侵襲力平均為36±16個(gè)細(xì)胞每視野。但經(jīng)MMP-2及MMP-15特異性單克隆抗體阻斷后，其侵襲能力受到明顯抑制，阻斷后，侵襲力平均為9±3個(gè)細(xì)

8、胞每視野。 結(jié)論： 1.MMP-2、MMP-9及MMP-15蛋白在肝癌組織中高水平表達(dá)，提示：MMP-2、MMP-9及MMP-15表達(dá)與肝癌發(fā)生、發(fā)展可能密切相關(guān)。 2.Hep-G2、SMMC-7721及MHCC-97H細(xì)胞中MMPmRNA存在差異表達(dá)，這可能是導(dǎo)致不同細(xì)胞株之間具有不同侵襲能力的關(guān)鍵因素。 3.細(xì)胞中的MMP-2、MMP-15蛋白經(jīng)特異性抗體阻斷后，能顯著抑制Hep-G2、SMMC-77