轉(zhuǎn)Bt基因植物花粉對(duì)意大利蜜蜂影響的研究.pdf

1、目前國(guó)際上紛紛開(kāi)展了轉(zhuǎn)抗蟲(chóng)基因植物花粉對(duì)非靶標(biāo)昆蟲(chóng)特別是對(duì)有益昆蟲(chóng)如蜜蜂、瓢蟲(chóng)、草蛉等影響的研究，但多針對(duì)昆蟲(chóng)發(fā)育和行為研究，針對(duì)影響機(jī)理研究尚不多見(jiàn)。本試驗(yàn)通過(guò)飼喂意大利蜜蜂幼蟲(chóng)轉(zhuǎn)Bt-Cry1Ab玉米、Bt-Cry1Ac棉花花粉，觀察幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育情況，測(cè)定體內(nèi)一些解毒酶、蛋白酶活性變化，并分離了意蜂、棉鈴蟲(chóng)中腸BBMV(BrushBorderMembranceVesicles)，進(jìn)行結(jié)合動(dòng)力學(xué)研究，主要結(jié)果如下： 取食Bt

2、花粉的蜜蜂與取食非Bt花粉的意蜂相比，幼蟲(chóng)和蛹的發(fā)育歷期差異沒(méi)有達(dá)到顯著水平，其4日齡、5日齡和6日齡幼蟲(chóng)的體重也沒(méi)有明顯差別。體內(nèi)酶活性方面，取食Bt玉米、棉花花粉蜜蜂6日齡幼蟲(chóng)體內(nèi)谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶活性、總蛋白酶活性處理組和對(duì)照組差異不顯著。而α-乙酸萘酯酶、乙酰膽堿酯酶、強(qiáng)、弱堿性類(lèi)胰蛋白酶和類(lèi)胰凝乳蛋白酶活性，處理組和對(duì)照組均有明顯差異。通過(guò)Elisa方法檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)取食Bt玉米花粉的蜜蜂6日齡幼蟲(chóng)體內(nèi)能夠檢測(cè)Cry1Ab殺蟲(chóng)蛋

3、白，取食Bt棉花花粉的蜜蜂6日齡幼蟲(chóng)體內(nèi)能夠檢測(cè)Cry1Ac殺蟲(chóng)蛋白。 利用差速離心法，分離了意蜂、敏感品系棉鈴蟲(chóng)BBMV。通過(guò)SDS-PAGE電泳發(fā)現(xiàn)：在53kDa～116kDa之間，意蜂存在5條比較明顯的條帶，其大小約為50、55、65、70、100kDa；而棉鈴蟲(chóng)在這區(qū)間內(nèi)只在68kDa處有一條比較明顯的條帶。在116kDa～212kDa之間，可以發(fā)現(xiàn)意蜂在130、160、180kDa處有三條蛋白條帶；而棉鈴蟲(chóng)在116kD

4、a～170kDa之間存在多條連續(xù)的蛋白條帶，在210kDa處有一條比較明顯的條帶。 利用125I標(biāo)記二種Bt蛋白(Cry1Ac、Cry2Ab)，分別與意蜂、棉鈴蟲(chóng)中腸BBMV進(jìn)行體外標(biāo)記結(jié)合試驗(yàn)。結(jié)果顯示：蜜蜂與Cry1Ac的親和性常數(shù)Kd值高于棉鈴蟲(chóng)(約為5倍)，說(shuō)明意蜂與Cry1Ac親和力低于棉鈴蟲(chóng)，且其結(jié)合位點(diǎn)濃度Rt值低于棉鈴蟲(chóng)(＞2倍)；意蜂與Cry2Ab的親和性常數(shù)Kd值遠(yuǎn)高于棉鈴蟲(chóng)品系(約為18倍)，說(shuō)明意蜂與Cr