轉Bt基因植物花粉對意大利蜜蜂影響的研究.pdf

1、目前國際上紛紛開展了轉抗蟲基因植物花粉對非靶標昆蟲特別是對有益昆蟲如蜜蜂、瓢蟲、草蛉等影響的研究，但多針對昆蟲發(fā)育和行為研究，針對影響機理研究尚不多見。本試驗通過飼喂意大利蜜蜂幼蟲轉Bt-Cry1Ab玉米、Bt-Cry1Ac棉花花粉，觀察幼蟲的生長發(fā)育情況，測定體內一些解毒酶、蛋白酶活性變化，并分離了意蜂、棉鈴蟲中腸BBMV(BrushBorderMembranceVesicles)，進行結合動力學研究，主要結果如下： 取食Bt

2、花粉的蜜蜂與取食非Bt花粉的意蜂相比，幼蟲和蛹的發(fā)育歷期差異沒有達到顯著水平，其4日齡、5日齡和6日齡幼蟲的體重也沒有明顯差別。體內酶活性方面，取食Bt玉米、棉花花粉蜜蜂6日齡幼蟲體內谷胱甘肽-S-轉移酶活性、總蛋白酶活性處理組和對照組差異不顯著。而α-乙酸萘酯酶、乙酰膽堿酯酶、強、弱堿性類胰蛋白酶和類胰凝乳蛋白酶活性，處理組和對照組均有明顯差異。通過Elisa方法檢測，發(fā)現取食Bt玉米花粉的蜜蜂6日齡幼蟲體內能夠檢測Cry1Ab殺蟲蛋

3、白，取食Bt棉花花粉的蜜蜂6日齡幼蟲體內能夠檢測Cry1Ac殺蟲蛋白。 利用差速離心法，分離了意蜂、敏感品系棉鈴蟲BBMV。通過SDS-PAGE電泳發(fā)現：在53kDa～116kDa之間，意蜂存在5條比較明顯的條帶，其大小約為50、55、65、70、100kDa；而棉鈴蟲在這區(qū)間內只在68kDa處有一條比較明顯的條帶。在116kDa～212kDa之間，可以發(fā)現意蜂在130、160、180kDa處有三條蛋白條帶；而棉鈴蟲在116kD

4、a～170kDa之間存在多條連續(xù)的蛋白條帶，在210kDa處有一條比較明顯的條帶。 利用125I標記二種Bt蛋白(Cry1Ac、Cry2Ab)，分別與意蜂、棉鈴蟲中腸BBMV進行體外標記結合試驗。結果顯示：蜜蜂與Cry1Ac的親和性常數Kd值高于棉鈴蟲(約為5倍)，說明意蜂與Cry1Ac親和力低于棉鈴蟲，且其結合位點濃度Rt值低于棉鈴蟲(＞2倍)；意蜂與Cry2Ab的親和性常數Kd值遠高于棉鈴蟲品系(約為18倍)，說明意蜂與Cr