重金屬納米鎳致癌分子機制研究.pdf

1、目的：本研究采用小鼠上皮JB6細胞作為研究對象，通過體外試驗來探索重金屬納米鎳可能的致癌毒性機制并選用合適的抗氧化劑來抑制納米鎳的毒性。為納米鎳潛在致癌性的評價、防治和拮抗藥物的開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：1、通過MTT試驗來檢測不同濃度納米鎳（0-10μg/cm2）對JB6細胞增殖的影響（即單純納米鎳染毒組），以及加入濃度為10μM的沒食子兒茶素沒食子酸酯（-Epigallocatechin-3-gallate, EGCG）對

2、經(jīng)不同濃度納米鎳染毒后細胞增殖的影響（抗氧化劑組）。
　　2、使用流式細胞儀對處理后兩組JB6細胞的細胞周期和細胞凋亡情況進行檢測。
　　3、通過熒光探針染料對處理后的兩組JB6細胞進行染色，并在激光共聚焦顯微鏡下觀察細胞微絲結(jié)構(gòu)和氧化應(yīng)激水平的變化。
　　4、通過螢光色素酶試驗來檢測處理后兩組JB6細胞中AP-1和NF-κB轉(zhuǎn)錄因子的表達情況。
　　5、通過蛋白印跡法檢測處理后兩組JB6細胞中MAPK信號通路相

3、關(guān)蛋白的表達情況。
　　結(jié)果：1、細胞增殖試驗結(jié)果顯示：在經(jīng)不同濃度納米鎳染毒24h后，細胞存活數(shù)目隨染毒濃度的升高而逐漸減少，而EGCG可對染毒后的細胞起到一定的保護作用，尤其在7.5和10μg/cm2的納米鎳染毒濃度。
　　2、細胞凋亡和周期試驗結(jié)果顯示：納米鎳造成的細胞死亡主要以凋亡為主，且低濃度的納米鎳可以將JB6細胞阻滯在G0/G1期，而高濃度的鎳納米顆粒能將細胞阻滯在G2/M期。而EGCG對納米鎳造成的細胞凋亡具

4、有一定保護作用且能將納米鎳染毒后的細胞維持在一個較高的G0/G1期比例。
　　3、經(jīng)高濃度的納米鎳染毒（7.5、10μg/cm2）后，JB6細胞微絲的正常結(jié)構(gòu)逐漸消失并圍繞細胞核形成明顯的致密束。EGCG能在一定程度上緩解納米鎳染毒造成的微絲結(jié)構(gòu)破壞，但無法阻止微絲致密束的形成。
　　4、EGCG能明顯降低納米鎳染毒后細胞內(nèi)ROS和O2-水平。
　　5、納米鎳能夠上調(diào)JB6細胞中Ap-1和NF-κB等轉(zhuǎn)錄因子的表達水平

5、，而EGCG能起到抑制作用。
　　6、納米鎳能上調(diào)MAPK通路磷酸化的水平而抗氧化劑能降低該通路磷酸化水平的表達。
　　結(jié)論：1、納米鎳能抑制JB6細胞的增殖同時增加細胞凋亡；抗氧化劑EGCG能抑制納米鎳的毒性并對細胞起到保護作用。
　　2、低濃度納米鎳染毒后能促進細胞凋亡而高濃度可能會損傷細胞DNA，EGCG能對納米鎳引起的致癌性起到一定的抑制作用。
　　3、納米鎳對JB6細胞的毒性可能通過氧化應(yīng)激損傷來實現(xiàn)，