重金屬納米鎳致癌分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：本研究采用小鼠上皮JB6細(xì)胞作為研究對(duì)象，通過體外試驗(yàn)來探索重金屬納米鎳可能的致癌毒性機(jī)制并選用合適的抗氧化劑來抑制納米鎳的毒性。為納米鎳潛在致癌性的評(píng)價(jià)、防治和拮抗藥物的開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：1、通過MTT試驗(yàn)來檢測(cè)不同濃度納米鎳（0-10μg/cm2）對(duì)JB6細(xì)胞增殖的影響（即單純納米鎳染毒組），以及加入濃度為10μM的沒食子兒茶素沒食子酸酯（-Epigallocatechin-3-gallate, EGCG）對(duì)

2、經(jīng)不同濃度納米鎳染毒后細(xì)胞增殖的影響（抗氧化劑組）。
　　2、使用流式細(xì)胞儀對(duì)處理后兩組JB6細(xì)胞的細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡情況進(jìn)行檢測(cè)。
　　3、通過熒光探針染料對(duì)處理后的兩組JB6細(xì)胞進(jìn)行染色，并在激光共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞微絲結(jié)構(gòu)和氧化應(yīng)激水平的變化。
　　4、通過螢光色素酶試驗(yàn)來檢測(cè)處理后兩組JB6細(xì)胞中AP-1和NF-κB轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)情況。
　　5、通過蛋白印跡法檢測(cè)處理后兩組JB6細(xì)胞中MAPK信號(hào)通路相

3、關(guān)蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：1、細(xì)胞增殖試驗(yàn)結(jié)果顯示：在經(jīng)不同濃度納米鎳染毒24h后，細(xì)胞存活數(shù)目隨染毒濃度的升高而逐漸減少，而EGCG可對(duì)染毒后的細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用，尤其在7.5和10μg/cm2的納米鎳染毒濃度。
　　2、細(xì)胞凋亡和周期試驗(yàn)結(jié)果顯示：納米鎳造成的細(xì)胞死亡主要以凋亡為主，且低濃度的納米鎳可以將JB6細(xì)胞阻滯在G0/G1期，而高濃度的鎳納米顆粒能將細(xì)胞阻滯在G2/M期。而EGCG對(duì)納米鎳造成的細(xì)胞凋亡具

4、有一定保護(hù)作用且能將納米鎳染毒后的細(xì)胞維持在一個(gè)較高的G0/G1期比例。
　　3、經(jīng)高濃度的納米鎳染毒（7.5、10μg/cm2）后，JB6細(xì)胞微絲的正常結(jié)構(gòu)逐漸消失并圍繞細(xì)胞核形成明顯的致密束。EGCG能在一定程度上緩解納米鎳染毒造成的微絲結(jié)構(gòu)破壞，但無法阻止微絲致密束的形成。
　　4、EGCG能明顯降低納米鎳染毒后細(xì)胞內(nèi)ROS和O2-水平。
　　5、納米鎳能夠上調(diào)JB6細(xì)胞中Ap-1和NF-κB等轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)水平

5、，而EGCG能起到抑制作用。
　　6、納米鎳能上調(diào)MAPK通路磷酸化的水平而抗氧化劑能降低該通路磷酸化水平的表達(dá)。
　　結(jié)論：1、納米鎳能抑制JB6細(xì)胞的增殖同時(shí)增加細(xì)胞凋亡；抗氧化劑EGCG能抑制納米鎳的毒性并對(duì)細(xì)胞起到保護(hù)作用。
　　2、低濃度納米鎳染毒后能促進(jìn)細(xì)胞凋亡而高濃度可能會(huì)損傷細(xì)胞DNA，EGCG能對(duì)納米鎳引起的致癌性起到一定的抑制作用。
　　3、納米鎳對(duì)JB6細(xì)胞的毒性可能通過氧化應(yīng)激損傷來實(shí)現(xiàn)，