聯(lián)合應(yīng)用sIL-5Rα及sIL-13Rα2對哮喘小鼠IgE、IFN-γ、VCAM-1、STAT6水平的影響.pdf

1、研究背景：
　　哮喘是一種以氣道高反應(yīng)性、可逆性氣流受限、氣道炎癥、不同程度的上皮下纖維化、粘液高分泌和氣道重塑為主要特點(diǎn)，且發(fā)病機(jī)制仍不是很清楚的復(fù)雜性疾病。研究發(fā)現(xiàn)，Th1/Th2比例失衡是哮喘主要發(fā)病機(jī)制之一。CD4+T細(xì)胞被分為兩個亞群，分別為Th1亞群和Th2亞群，Th1細(xì)胞主要分泌IFN-γ，介導(dǎo)細(xì)胞免疫，可負(fù)性調(diào)節(jié)Th2細(xì)胞引起的反應(yīng)，抑制肺部過敏性炎癥的發(fā)展；Th2細(xì)胞主要產(chǎn)生IL-4，IL-5，IL-13等，介導(dǎo)

2、免疫和過敏性疾病。研究證實(shí)哮喘與Th2細(xì)胞表達(dá)增多有密切關(guān)系，且已在哮喘動物及患者的血清、支氣管肺泡灌洗液（BALF）、氣管活檢組織中被證實(shí)。IL-5可激活一系列嗜酸粒細(xì)胞（EOS）反應(yīng)，能夠與EOS受體結(jié)合，在調(diào)節(jié)EOS產(chǎn)生、分化、聚集、活化及延長成熟EOS生存期中具有重要作用，IL-5可促進(jìn)B細(xì)胞分化和增殖，并增強(qiáng)IL-4促進(jìn)B細(xì)胞合成和分泌IgE的能力，還可促進(jìn)嗜堿粒細(xì)胞聚集和活化，使粘液分泌增加，氣道纖維化和氣道重塑。IL-13

3、可調(diào)節(jié)IgE、肥大細(xì)胞、EOS活性，并介導(dǎo)氣道高反應(yīng)性（AHR）和粘液高分泌等，在哮喘的發(fā)病機(jī)制中具有重要的作用。可溶性IL-5受體α（sIL-5Rα）可結(jié)合IL-5，抑制IL-5誘導(dǎo)的信號傳導(dǎo)和細(xì)胞因子釋放，抑制過敏原所致EOS分化，起免疫調(diào)節(jié)作用。IL-13受體α2（IL-13Rα2）對IL-13有高親和力，并作為一種誘騙受體，抑制IL-13的信號傳導(dǎo)和反應(yīng)。IL-13Rα2存在三種形式，分別為胞膜蛋白、胞內(nèi)蛋白和可溶性蛋白，其中可

4、溶性IL-13Rα2（sIL-13Rα2）發(fā)揮重要作用。sIL-13Rα2可顯著降低致敏原所致的AHR和炎癥反應(yīng)。支氣管過量的IL-13Rα2可降低IL-13相關(guān)性STAT6磷酸化。研究發(fā)現(xiàn)IL-5、IL-13可通過介導(dǎo)IgE、VCAM-1、STAT6使血管通透性改變，炎癥細(xì)胞增生、遷移、浸潤等，從而出現(xiàn)咳嗽、喘息、AHR等哮喘癥狀。目前我們尚未看到通過聯(lián)合應(yīng)用sIL-5Rα及sIL-13Rα2對哮喘小鼠IgE、IFN-γ、VCAM-1

5、、STAT6水平影響的相關(guān)文獻(xiàn)。本研究擬探討聯(lián)合應(yīng)用sIL-5Rα和sIL-13Rα2對哮喘小鼠IgE、IFN-γ、VCAM-1、STAT6水平的影響，探索治療哮喘的新方法。
　　目的：
　　1.通過觀察聯(lián)合應(yīng)用sIL-5Rα及sIL-13Rα2對哮喘小鼠IgE、IFN-γ水平影響，了解哮喘的發(fā)病機(jī)制Th1/Th2比例失衡，并為哮喘治療尋求新方法；
　　2.通過觀察聯(lián)合應(yīng)用sIL-5Rα及sIL-13Rα2對哮喘小鼠V

6、CAM-1、STAT6水平影響，進(jìn)一步探討IL-5及IL-13在哮喘發(fā)病機(jī)制中的作用，以了解聯(lián)合應(yīng)用sIL-5Rα及sIL-13Rα2在哮喘治療中的價值。
　　方法：
　　1.100只BALB/c小鼠隨機(jī)分為兩部分，各50只，分別用于實(shí)驗(yàn)第一部分和第二部分，每部分小鼠隨機(jī)分為正常組、哮喘組、sIL-5Rα治療組、sIL-13Rα2治療組及聯(lián)合sIL-5Rα、sIL-13Rα2治療組（簡稱聯(lián)合治療組）。哮喘組及治療組用雞卵白蛋

7、白（OVA）和氫氧化鋁致敏，用OVA激發(fā)，建立小鼠哮喘模型，正常組用生理鹽水代替，其中sIL-5Rα治療組、sIL-13Rα2治療組及聯(lián)合治療組分別于激發(fā)前30分鐘腹腔注射100μgsIL-5Rα、sIL-13Rα2及聯(lián)合應(yīng)用sIL-5Rα及sIL-13Rα2各100μg，正常組和哮喘組激發(fā)前30分鐘腹腔注射相同體積生理鹽水；
　　2.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法測定各組小鼠BALF中IgE、IFN-γ水平及血清中IgE、IF

8、N-γ、VCAM-1水平；
　　3.免疫組化法和反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測各組小鼠肺組織STAT6水平變化。
　　結(jié)果：
　　1.①與正常組比較，哮喘組BALF及血清IgE水平均明顯升高[(14.53±0.90）ng/mL vs（8.20±0.69）ng/mL及（1123.77±207.58）ng/mL vs（264.48±67.99）ng/mL]，IFN-γ水平均明顯降低[（107.96±6.63）p

9、g/m vs (371.4±32.92)pg/mL及（468.68±29.01）pg/mL vs（946.4±75.61）pg/mL]，差異具有顯著性（P<0.01）。
　　②與哮喘組比較，sIL-5Rα治療組、sIL-13Rα2治療組、聯(lián)合治療組BALF及血清IgE水平均明顯降低（P<0.01）[分別為(12.42±0.40）ng/mL及（750.54±27.32）ng/mL、（12.49±0.38）ng/mL及（730.68±

10、38.04）ng/mL、（10.82±2.17）ng/mL及（439.92±25.01）ng/mL]，IFN-γ水平均明顯升高（P<0.01）[分別為（197.92±24.30）pg/mL及（590.51±28.24）pg/mL、（196.2±18.27）pg/mL及（574.9±26.61）pg/mL、（343.9±33.51）pg/mL及（861.4±36.31）pg/mL]。
　?、叟c單用治療組比較，聯(lián)合治療組可顯著升高Ig

11、E水平，而降低IFN-γ水平，差異亦具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　2.①與正常組[（203.56±22.26）ng/mL]比較，哮喘組血清VCAM-1水平[(361.81±20.16)ng/mL]明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；與哮喘組比較，sIL-5Rα治療組、sIL-13Rα2治療組、聯(lián)合治療組VCAM-1水平明顯下降[分別為（311.61±25.13）ng/mL、（306.33±23.63）ng/mL、

12、（248.51±19.32）ng/mL]，差異具有顯著性（P<0.01）；與sIL-5Rα治療組及sIL-13Rα2治療組比較，聯(lián)合治療組血清VCAM-1下降亦具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　?、诿庖呓M化法及RT-PCR法結(jié)果顯示：與正常組比較，哮喘組肺組織STAT6含量明顯增加（P<0.01)；與哮喘組比較，sIL-13Rα2治療組及聯(lián)合治療組肺組織STAT6含量明顯降低（P<0.01），sIL-5Rα治療組肺組織STAT6