The Effect of γ-TmT(γ-TocopheroL-Rich Mixture of Tocopherols)on Esophageal Squamous Cell Carcinoma In Vitro.pdf

1、目的：(1)使用γ-TMT、木犀草素和亞硒酸鈉單獨(dú)或及聯(lián)合對(duì)Eca-109細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)，探討其對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞凋亡的作用。(2)觀察亞硒酸鈉、硒和γ-TMT單獨(dú)及聯(lián)合干預(yù)對(duì)食管癌Eca-109細(xì)胞抗氧化酶活性的影響。(3)評(píng)價(jià)亞硒酸鈉、γ-TMT和木犀草素對(duì)Eca-109細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2，Bax和caspase-3的影響。
　　方法：(1)利用四甲基氮唑藍(lán)（Methyl Thiazolyl Tetrazolium，MTT

2、）法測(cè)定γ-TMT、亞硒酸鈉和木犀草素干預(yù)對(duì)Eca109細(xì)胞增殖的影響;倒置顯微鏡觀察不同劑量干預(yù)物對(duì)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。(2)使用試劑盒測(cè)定γ-TMT、木犀草素和亞硒酸鈉干預(yù)Eca-109細(xì)胞后不同劑量組抗氧化酶活性的指標(biāo)，包括谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽還原酶(GR)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、總超氧化物歧化酶(SOD)以及總抗氧化能力(TAOC)和丙二醛(MDA)的測(cè)定。(3)用γ-TMT

3、、木犀草素和亞硒酸鈉處理Eca-109細(xì)胞，提取蛋白和RNA，通過(guò)實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)測(cè)定Bcl-2和Bax兩個(gè)凋亡蛋白的表達(dá)，并通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定caspase-3蛋白表達(dá)，分析其在Eca-109細(xì)胞凋亡中的作用。
　　結(jié)果：(1)MTT分析結(jié)果表明，隨著γ-TMT濃度增加，其對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用顯著增加，具有劑量效應(yīng)關(guān)系（p＜0.05）。流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明γ-TMT可顯著誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡(p＜

4、0.05)。γ-TMT與木犀草素聯(lián)合干預(yù)可抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，與γ-TMT單獨(dú)干預(yù)具有顯著差異。亞硒酸鈉干預(yù)食管上皮細(xì)胞可顯著抑制細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。亞硒酸鈉與γ-TMT聯(lián)合干預(yù)結(jié)果表明，與單獨(dú)干預(yù)結(jié)果比較，細(xì)胞增殖的抑制率及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的凋亡率顯著增加(p＜0.05）。(2)亞硒酸鈉、γ-TMT和木犀草素對(duì)抗氧化酶活性的影響具有顯著差異，木犀草素對(duì)MDA活性沒(méi)有影響，γ-TMT對(duì)CAT活性沒(méi)有影響。(3)γ-TMT、木犀