CelL-in-cell胞內(nèi)嵌和結(jié)構(gòu)形成機(jī)制及意義初探.pdf

1、Cell-in-cell是指活細(xì)胞進(jìn)入其他細(xì)胞體內(nèi)的現(xiàn)象，與吞噬作用主動(dòng)將死細(xì)胞或凋亡細(xì)胞包裹攝入不同，在cell-in-cell胞內(nèi)嵌合結(jié)構(gòu)的形成過(guò)程中，兩種細(xì)胞都表現(xiàn)出一定的作用，并且cell-in-cell胞內(nèi)嵌合結(jié)構(gòu)形成后，內(nèi)在的細(xì)胞表現(xiàn)出一定的生物活性，雖然大部分最終死亡，但有些能在細(xì)胞內(nèi)存活，進(jìn)行細(xì)胞分裂，甚至能逃逸?？梢詫ell-in-cell簡(jiǎn)單地分為兩類，同種細(xì)胞之間(homotypiccell-in-cell)和異

2、種細(xì)胞間(heterotypic cell-in-cell)。
　　自19世紀(jì)末始，就有科學(xué)家在組織切片中發(fā)現(xiàn)這種完整細(xì)胞進(jìn)入活細(xì)胞的行為，且主要發(fā)現(xiàn)在淋巴細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞間。1925年Lewis用實(shí)驗(yàn)手段觀察到蛙血細(xì)胞進(jìn)入相鄰細(xì)胞的現(xiàn)象，1956年Humble等人首先將這一現(xiàn)象定義為Emperipo lesis—“inside round about wandering”，即伸入運(yùn)動(dòng)，并提出具有伸入運(yùn)動(dòng)傾向的淋巴細(xì)胞對(duì)癌細(xì)胞、巨核

3、細(xì)胞及其他高有絲分裂水平的細(xì)胞具有顯著的親和力，并推測(cè)機(jī)體可能借助這些淋巴細(xì)胞表達(dá)對(duì)癌細(xì)胞的免疫功能。
　　我們的前期研究發(fā)現(xiàn)淋巴細(xì)胞進(jìn)入腫瘤細(xì)胞具有普遍性，多種具有殺傷能力的淋巴細(xì)胞均能進(jìn)入腫瘤細(xì)胞中，不同淋巴細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞形成cell-in-cell的比率有差別，而且免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間的cell-in-cell現(xiàn)象沒(méi)有細(xì)胞種系來(lái)源的限制性。
　　Cell-in-cell自發(fā)現(xiàn)起便被高度關(guān)注，然而由于細(xì)胞自發(fā)形成cel

4、l-in-cell胞內(nèi)嵌和結(jié)構(gòu)的比率較低（大部分在≤10％，除去部分同種細(xì)胞鉆瘤外），因此研究的要點(diǎn)是分離高純度cell-in-cell胞內(nèi)嵌和結(jié)構(gòu)，所以高效、簡(jiǎn)易的分離技術(shù)也將成為高度關(guān)注和引用的熱點(diǎn)。
　　本文主要通過(guò)建立人外周血單核淋巴細(xì)胞(PBMCs)-人肝癌細(xì)胞PLC/PRF/5以及小鼠脾淋巴細(xì)胞-PLC/PRF/5兩組淋巴細(xì)胞-腫瘤細(xì)胞相互作用形成的異種細(xì)胞間cell-in-cell胞內(nèi)嵌和結(jié)構(gòu)的模型，利用流式細(xì)胞術(shù)檢

5、測(cè)cell-in-cell現(xiàn)象發(fā)生幾率，建立一種客觀、高效的檢測(cè)技術(shù)，并使得分離高純度的cell-in-cell胞內(nèi)嵌和結(jié)構(gòu)成為可能。并且，研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)淋巴細(xì)胞體外活化提高殺傷性淋巴細(xì)胞的比例后，cell-in-cell的形成率提高，表明殺傷性細(xì)胞更容易形成cell-in-cell胞內(nèi)嵌和結(jié)構(gòu)。
　　在此技術(shù)手段基礎(chǔ)上，我們分別利用小鼠脾淋巴細(xì)胞-PLC/PRF/5以及小鼠LAK細(xì)胞-PLC/PRF/5的模型，加之流式細(xì)胞分選技術(shù)的

6、應(yīng)用，分選出高純度的cell-in-cell胞內(nèi)嵌和結(jié)構(gòu)（純度＞80％），即分別包含小鼠脾淋巴細(xì)胞及小鼠LAK細(xì)胞的PLC/PRF/5。進(jìn)一步通過(guò)基因芯片技術(shù)尋找到在cell-in-cell的形成和存在過(guò)程中靶細(xì)胞發(fā)生表達(dá)差異，表達(dá)上調(diào)的基因45個(gè)，參與的通路主要有細(xì)胞粘附、細(xì)胞通訊、信號(hào)轉(zhuǎn)到、脂類代謝、能量代謝等;效應(yīng)細(xì)胞中表達(dá)差異的基因1510種，初步探索cell-in-cell形成機(jī)制，基因的具體作用還需后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。
　　

7、另外，將分選后的含有cell-in-cell胞內(nèi)嵌和結(jié)構(gòu)的PLC/PRF/5細(xì)胞(P-L，P-S)與未形成cell-in-cell胞內(nèi)嵌和結(jié)構(gòu)的PLC/PRF/5(PLCsorting)細(xì)胞進(jìn)行平板克隆形成試驗(yàn)。結(jié)果表明:P-L，P-S形成肉眼可見克隆時(shí)間較PLC細(xì)胞早，培養(yǎng)兩周后形成克隆數(shù)明顯增多。細(xì)胞克隆形成能力與腫瘤細(xì)胞的群體依賴性和增殖能力密切相關(guān)，其大小可以反映腫瘤細(xì)胞的成瘤能力和惡性程度。表明淋巴細(xì)胞進(jìn)入腫瘤細(xì)胞后對(duì)腫瘤細(xì)胞