“補腎壯骨合劑”在自體骨修復(fù)骨缺損過程中TGF-β基因的表達.pdf

1、目的：探討具有活血補腎作用的“補腎壯骨合劑”對骨缺損修復(fù)過程的作用機制及轉(zhuǎn)化生長因子（transforming growth factor beta，TGF-β）基因的表達。
　　方法：實驗家兔90只，體重為2.0-2.5kg，雌雄不限，隨機分成5組，每組18只，其中9只為實驗組，9只為對照組。實驗組與對照組均取兩側(cè)橈骨（巴比妥鈉20mg/kg靜脈麻醉后），在無茵條件下，切開皮膚，逐層分離，充分暴露橈骨中段，用磨鉆磨成20mm的骨

2、缺損（包括骨膜），同時取兩側(cè)髂骨，用咬骨鉗及剪刀制成大小1—2mm的顆粒狀骨，植于左右橈骨骨缺損處。實驗組用含“補腎壯骨合劑”（骨碎補、續(xù)斷、自然銅土鱉蟲）的飼料喂養(yǎng)，對照組用不含“補腎壯骨合劑”的飼料喂養(yǎng)。術(shù)后連續(xù)肌肉注射頭孢唑林鈉4天，預(yù)防切口的感染。分別于術(shù)后1、2、4、6、8周處死家兔，取骨缺損植骨區(qū)組織，進行HE及TGF-β多克隆抗體的免疫組化染色、TGF-β的cDNA探針原位雜交，在光鏡與電鏡下觀察，并用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈（R

3、T-PCR）反應(yīng)，具體觀察和分析“補腎壯骨合劑”對修復(fù)骨缺損中轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-β）基因表達的影響及骨組織修復(fù)情況。
　　結(jié)果：病理學觀察：實驗組1周時移植骨內(nèi)有部分移植骨細胞壞死及細胞核濃縮；2-4周時骨皮質(zhì)長入移植骨內(nèi)并有少量軟骨細胞形成并伴有大量血管生長；4-8周長骨植骨區(qū)的血管數(shù)量增多，有明顯網(wǎng)狀新骨生成并伴有骨髓腔的形成。對照組1周時缺損區(qū)有大量的炎性反應(yīng)并部分移植骨壞死；2-4周有明顯的軟骨細胞形成；6-8周時有較

4、多的編織骨生成，鈣化進一步增強。電鏡觀察：2周時實驗組細胞成梭形，骨細胞核濃縮，染色質(zhì)凝聚靠邊。對照組無明顯梭形細胞生成，骨細胞周圍可見膠原纖維，核基質(zhì)致密靠邊；4周時實驗組毛細血管數(shù)量增多，骨細胞骨陷窩及骨小梁形成，對照組毛細血管數(shù)量相對較少，周圍有骨基質(zhì)形成。8周時實驗組成骨細胞形成，編織骨明顯，對照組成骨細胞數(shù)量少及周圍骨質(zhì)增多，編織量少。免疫組化染色：實驗組1周TGF-β染色呈弱陽性表達。2周組TGF-β染色呈陽性表達，4周組T

5、GF-β染色呈強陽性表達。6-8周組TGF-β染色呈陽性染色。對照組：1周組TGF-β染色同對照組無明顯區(qū)別，不同的是對照組除4周組TGF-β染色呈陽性染色外，2、6、8周組TGF-β染色均呈弱陽性表達。原位雜交方法：實驗組1周時骨髓間質(zhì)細胞TGF-β均呈陰性表達，2周時骨折端骨痂中骨細胞 TGF-β染色呈弱陽性表，4周時骨痂中骨細胞TGF-β成強陽性表達，6-8周后新生成骨細胞TGF-β染色呈弱陽性表達；對照組1周時TGF-β呈陰性表

6、達，2、6、8周時一些成纖維細胞和軟骨細胞呈弱陽性表達，4周時TGF-β染色呈陽性表達。RT--PCR結(jié)果：實驗組1周TGF-β的相對表達量為3.69±0.01，對照組TGF-β相對表達量為1.00±0.00；實驗組2周TGF-β的相對表達量為2.35±0.02，對照組TGF-β相對表達量為1.40±0.01；實驗組4周TGF-β的相對表達量為3.18±0.01，對照組TGF-β相對表達量為1.59±0.02；實驗組6周TGF-β的相對