豬小腸抗菌肽分離鑒定及其生物活性研究.pdf

1、新鮮豬小腸經(jīng)充分破碎后,再經(jīng)高溫處理、乙酸浸提,最后經(jīng)Sephadex G-100和Sephadex G-25凝膠柱過濾層析,超濾離心管超濾后,收集各組分并用瓊脂糖彌散法檢測(cè)各組分的抗菌活性.具有抗菌活性的組分,經(jīng)Tricine SDS-PAGE分析為一條蛋白帶,分子量約為5972Da左右,得到電泳純的豬小腸抗菌肽,并進(jìn)一步對(duì)分離純化的豬小腸抗菌肽的生物學(xué)功能進(jìn)行了如下研究.采用瓊脂糖彌散實(shí)驗(yàn)和活菌計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了豬小腸抗菌肽對(duì)雞大腸桿菌

2、O<,1> C83845株、雞白痢沙門氏菌C79-13株、E.coli O<,2>、E.coli O<,78>、豬致病性大腸桿菌的自然分離株、雞致病性大腸桿菌自然分離株、白色葡萄球菌、金黃色葡萄球菌ATCC25923株、豬致病性沙門氏菌自然分離株、綠膿桿菌ATCC27853株、魚致病性嗜水氣單胞菌等11株細(xì)菌的作用.結(jié)果表明,豬小腸抗菌肽除對(duì)E.coli O<,2>和豬致病性沙門氏菌自然分離株作用較弱外,對(duì)以上其他9株菌株均有較強(qiáng)的抑制

3、或殺滅作用,殺菌率由59.5﹪~98.5﹪不等.揭示了該物質(zhì)具有較強(qiáng)的抗菌活性和較廣的抗菌譜.將雞大腸桿菌O<,1> C83845株、雞白痢沙門氏菌C79-13株和金黃色葡萄球菌ATCC25923株與豬小腸抗菌肽在室溫下作用15min.掃描電鏡下觀察豬小腸抗菌肽對(duì)這三株細(xì)菌形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響.結(jié)果發(fā)現(xiàn),豬小腸抗菌肽可作用于細(xì)菌,導(dǎo)致細(xì)菌表面出現(xiàn)囊泡樣或不規(guī)則突起樣結(jié)構(gòu),細(xì)菌嚴(yán)重變形、扭曲,表面變得粗糙,皺縮,胞膜破裂,內(nèi)容物外流而死亡.從而

4、可推斷該抗菌肽類物質(zhì)對(duì)細(xì)菌具有溶膜性作用,在一定程度上揭示了該物質(zhì)的抗菌機(jī)理.將IBV用豬小腸抗菌肽處理后再接種9日齡雞胚,測(cè)定雞胚尿囊液中的IBV血凝效價(jià),并觀察雞胚病變.結(jié)果發(fā)現(xiàn),豬小腸抗菌肽可使雞胚尿囊液中IBV的血凝效價(jià)降低,同時(shí)還能抑制IBV所引起的雞胚病變.用豬小腸抗菌肽處理NDV和IBDV后再感染SPF雞,結(jié)果發(fā)現(xiàn),豬小腸抗菌肽可以降低ND和IBD的發(fā)病率和死亡率.表明豬小腸抗菌肽對(duì)IBV、NDV和IBDV等有一定的滅活作

5、用.給雛雞肌肉注射豬小腸抗菌肽后,定期測(cè)定雛雞腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率和吞噬指數(shù)、免疫器官指數(shù)、ND弱毒苗及IBD中等毒力苗的血清抗體水平、生長(zhǎng)指標(biāo)與各段腸管腸絨毛長(zhǎng)度、黏膜厚度、絨毛長(zhǎng)度與隱窩深度比值(V/C),上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞(IEL)、肥大細(xì)胞、杯狀細(xì)胞的數(shù)量以及腸道組織中IgA陽性物面積系數(shù).結(jié)果發(fā)現(xiàn)豬小腸抗菌肽可提高雞腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率和吞噬指數(shù);提高免疫器官指數(shù);提高ND弱毒苗及IBD中等毒力苗的血清抗體水平;使腸道粘膜IEL、肥大

6、細(xì)胞和杯狀細(xì)胞數(shù)量以及腸道組織中的IgA陽性物面積系數(shù)顯著增加;可提高各段腸管腸絨毛長(zhǎng)度和V/C值,但對(duì)腸黏膜厚度無顯著影響,實(shí)驗(yàn)組雞的生長(zhǎng)指標(biāo)也較對(duì)照組明顯升高.另外,豬小腸抗菌肽也可以增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞LDH活性.這些結(jié)果表明豬小腸抗菌肽對(duì)雞特異性免疫與腸道粘膜免疫水平均有不同程度的提高作用;豬小腸抗菌肽還能促進(jìn)雛雞生長(zhǎng)發(fā)育,并從結(jié)構(gòu)上初步揭示了豬小腸抗菌肽促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育的機(jī)理是使腸絨毛增長(zhǎng),改善了腸絨毛結(jié)構(gòu).該研究還利用化學(xué)交聯(lián)法