薤脫毒快繁技術(shù)體系的構(gòu)建及優(yōu)化初探.pdf

1、薤（Allium chinense G．Don）起源于中國，是一種藥、菜兼用的傳統(tǒng)蔬菜。因長期進(jìn)行無性繁殖而致使病毒積累，近年來，薤病毒病已日益成為其種性退化、品質(zhì)下降以及產(chǎn)量降低的重要原因之一。目前，通過莖尖培養(yǎng)獲得脫毒種苗是防治薤病毒病害和減緩種質(zhì)退化的最為有效的措施。 本文探索了薤的組織培養(yǎng)、微體繁殖的有效途徑，就薤脫毒苗的獲得、擴(kuò)繁、試管鱗莖的形成進(jìn)行了系統(tǒng)的研究。利用莖盤具有很強(qiáng)的萌芽潛力以及試管鱗莖對環(huán)境具有廣泛的適

2、應(yīng)能力的特性，研究組織培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基激素配比，開發(fā)出一套繁殖系數(shù)高、操作簡便、種苗容易馴化、控制的薤脫毒快繁技術(shù)體系。結(jié)果表明： 1．在薤的莖盤外植體培養(yǎng)的前期消毒實(shí)驗(yàn)中，鱗莖沖洗后，酒精浸潤30s后，用2％的次氯酸鈉溶液加兩滴吐溫-20消毒10min，無菌水清洗4～5次，污染率降到13.8％，同時相比升汞對試管苗的生長影響較小。 2．使用0.5g/L PVP進(jìn)行薤的鱗片愈傷組織誘導(dǎo)時可以有效地抑制外植體的褐化。通過M

3、S、LS和B〈’5〉三種培養(yǎng)基的比較試驗(yàn)，篩選出LS培養(yǎng)基為適合薤莖尖培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基，同時，選取0.5～1.0mm莖尖培養(yǎng)可以達(dá)到較好的脫毒效果，脫毒率可達(dá)85％，同時成苗率為87％。而采用二次莖尖切割培養(yǎng)可以降低莖尖培養(yǎng)技術(shù)難度的并保證一定的脫毒效果。 3．病毒檢測實(shí)驗(yàn)中，選用指示植物法和分子技術(shù)（RT-PCR）對宜昌當(dāng)?shù)剞幕ㄈ~病毒進(jìn)行前期的檢測，兩種方法同時檢測出薤花葉病毒。脫毒后利用指示植物法與分子技術(shù)結(jié)合進(jìn)行大批量脫

4、毒苗的脫毒效果鑒定，建立了一套有效的脫毒檢測手段。 4．在傳統(tǒng)莖尖培養(yǎng)脫毒實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，莖尖培養(yǎng)結(jié)合32℃和37℃每12h交替變溫處理14d可以達(dá)到最佳的脫毒效果，脫毒率可達(dá)94％。 5．對薤脫毒苗的擴(kuò)繁，選用NAA和6-BA兩種激素對薤的試管苗增殖率運(yùn)用二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)方法對激素配比進(jìn)行尋優(yōu)，結(jié)果表明0.43～0.48mg/LNAA和1.20～1.30mg/L 6-BA配比可以達(dá)到最佳的增殖