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文檔簡介
1、為了研究水稻花粉發(fā)育的機理,,本文利用60Coγ射線誘變的方法構建水稻雄性不育突變體庫,在回交后代中獲得兩個水稻隱性單基因控制的突變?nèi)后wOsms2和Osms3。 對Osms2進行組織切片觀察發(fā)現(xiàn),在小孢子四分體以前小孢子及藥室各層壁都發(fā)育正常,但隨后小孢子變形降解不能發(fā)育成花粉粒.而醋解實驗也顯示在四分體時期小孢子外壁發(fā)育不正常,最后導致小孢子降解不能形成成熟的花粉粒。Osms2與秈稻廣陸矮雜交,自交獲得F2代分離群體進行遺傳定
2、位.通過遺傳定位方法,首先將突變基因座位定位在水稻第3染色體InDel標記0S302和SJ302之間.為了對OsMS2座位進行精細定位,我們在0S302和SJ302之間發(fā)展了6對有多態(tài)性InDel分子標記,將該基因座位定位在CL6-4和CL7-4之間,距離二者分別為0.1cM和0.04cM,物理距離為100kb左右。分析這個范圍共有13個基因,其中的一個類似MS2基因與擬南芥雄性不育基因MS2同源,測序發(fā)現(xiàn),該基因的第八個外顯子有一個堿
3、基缺失,導致發(fā)生移碼突變。初步確定OsMS2即為候選基因。 Osms3突變體可進行正常減數(shù)分裂,形成二分體和四分體,但突變體的花粉壁發(fā)育與野生型相比,其絨氈層出現(xiàn)過早的液泡化和降解異常的表型。發(fā)育至小孢子晚期,突變體的小孢子數(shù)目變少,且無淀粉的積累,導致了不能形成正常的花粉粒。為克隆編碼OsMS3的基因,用Osms3與秈稻廣陸矮4號雜交產(chǎn)生的F2代群體,對OsMS3位點進行遺傳定位,發(fā)現(xiàn)OsMS3與位于9號染色體上的Indel分
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