MMP-9和HPA在妊娠期高血壓疾病大鼠腎臟的表達(dá)及低分子量肝素干預(yù)治療.pdf

1、背景與目的：妊娠期高血壓疾病是妊娠期特有的疾病，以妊娠20周后高血壓、蛋白尿、水腫為特征，并伴有全身多臟器的損害。該病嚴(yán)重影響母嬰健康，是孕產(chǎn)婦和圍生兒發(fā)病及死亡的主要原因之一。妊娠期高血壓疾病在我國(guó)發(fā)病率為9.4％，國(guó)外報(bào)導(dǎo)7％～12％，目前認(rèn)為其發(fā)病起源于胎盤病理生理改變，進(jìn)一步由高血壓狀態(tài)導(dǎo)致全身血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，引起腦、心、肺、肝、腎等重要臟器嚴(yán)重缺血，其中腎臟損害是其早期發(fā)病特征，而腎臟損害機(jī)制的研究國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)告甚少。腎臟特

2、征性損害主要表現(xiàn)為腎小球毛細(xì)血管壁和基底膜的增生及蛋白尿的產(chǎn)生。發(fā)生機(jī)制尚不清楚，近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)合成和降解失衡是各種原發(fā)性腎病或者繼發(fā)性腎病發(fā)生、發(fā)展的重要原因。
　　 基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)和乙酰肝素酶(HPA)作為ECM的降解酶，其表達(dá)變化可能是妊娠期高血壓疾病腎臟損害的重要原因。臨床上無(wú)特效治療妊娠期高血壓疾病腎臟損害的藥物，有使用肝素治療的經(jīng)驗(yàn)，但由于肝素易導(dǎo)致出血，故臨床未推廣使用，低分子量

3、肝素(LMWH)是從普通肝素中提取出來(lái)的，具有出血副作用少、生物利用度高等特點(diǎn)，其生物學(xué)作用主要為抗凝、擴(kuò)張血管、降低血壓、減少腎小球基底膜細(xì)胞的增殖等。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)制備妊娠高血壓疾病動(dòng)物模型并用LMWH進(jìn)行干預(yù)治療，觀察MMP-9和HPA在妊娠期高血壓疾病大鼠腎臟組織中的表達(dá)變化及LMWH的預(yù)防和治療作用，并探討妊娠期高血壓疾病腎臟損害機(jī)制。
　　 材料與方法：(1)妊娠期高血壓疾病動(dòng)物模型的制備與分組：取正常Wistar雌性大

4、鼠45只，按雌雄2：1合籠，每日清晨取雌鼠陰道分泌物涂片，發(fā)現(xiàn)精子計(jì)為妊娠第1d。將妊娠鼠隨機(jī)分為3組，正常妊娠組、妊娠期高血壓疾病組和LMWH干預(yù)組各15只，將妊娠期高血壓疾病組孕鼠于妊娠第14天開(kāi)始皮下注射亞硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)250mg/kg，LMWH干預(yù)組孕鼠于妊娠第14天開(kāi)始皮下注射L-NAME250mg/kg，于妊娠第16天開(kāi)始皮下注射L-NAME250mg/kg(上午)、LMWH600IU/kg(下午)，正常

5、妊娠組孕鼠注射等量的生理鹽水，每日一次。另取15只未交配健康孕齡期雌鼠為非孕對(duì)照組。四組均于妊娠第12天起每日測(cè)量大鼠尾動(dòng)脈血壓，隔日收集24小時(shí)尿量以測(cè)定尿蛋白。(2)標(biāo)本采集：于妊娠第21天在20％烏拉坦(5ml/kg)麻醉下，取雙腎部分置于10％中性福爾馬林浸泡固定，待用HE染色和免疫組織化學(xué)染色。收集24小時(shí)尿量，采用磺柳酸-硫酸鈉比濁法，以牛血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)蛋白測(cè)尿蛋白。(3)免疫組織化學(xué)方法：腎臟組織中MMP-9和HPA的表

6、達(dá)用免疫組織化學(xué)測(cè)定，步驟按照試劑盒說(shuō)明操作。(4)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，數(shù)據(jù)表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)，兩組間均數(shù)的比較用t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析用Spearman等級(jí)相關(guān)，顯著性水準(zhǔn)α=0.05。
　　 結(jié)果：1.實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果：妊娠期高血壓疾病組大鼠平均動(dòng)脈壓、尿蛋白于用藥第二天開(kāi)始升高，結(jié)束分娩時(shí)較正常妊娠組和非孕對(duì)照組明顯升高。LMWH干預(yù)組平均動(dòng)脈壓、尿蛋白較妊娠期高血壓疾病組明顯降低，但仍未

7、達(dá)到正常妊娠水平。2.腎臟組織病理學(xué)變化：妊娠期高血壓疾病組大鼠腎臟組織HE染色顯示腎小球部分系膜細(xì)胞和基底膜細(xì)胞增生，系膜基質(zhì)增多，腎小球動(dòng)脈壁玻璃樣變性。LMWH干預(yù)組大鼠腎臟組織腎小球系膜細(xì)胞和基底膜細(xì)胞增生減輕。3.腎臟組織MMP-9和HPA表達(dá)變化：在非孕對(duì)照組，MMP-9和HPA在腎小球幾乎無(wú)表達(dá)，僅在腎小管有輕微表達(dá)；在正常妊娠組，MMP-9和HPA在腎小球的表達(dá)較對(duì)照組增強(qiáng)；在妊娠期高血壓疾病組中，MMP-9和HPA在腎

8、小球的表達(dá)較正常妊娠組明顯增強(qiáng)；在LMWH干預(yù)組，MMP-9和HPA在腎小球的表達(dá)較妊娠期高血壓疾病組明顯減弱，但仍未達(dá)到正常妊娠水平。4.妊娠期高血壓疾病組大鼠MMP-9和HPA在腎小球的表達(dá)成相關(guān)關(guān)系，兩者成正相關(guān)。
　　 結(jié)論：1.妊娠期高血壓疾病組大鼠腎臟組織中MMP-9和HPA的表達(dá)明顯高于正常妊娠組和非孕對(duì)照組。腎臟組織中MMP-9和HPA的表達(dá)增強(qiáng)可能是妊娠期高血壓疾病腎臟損害的機(jī)制之一。
　　 2.MMP