人B淋巴細(xì)胞刺激因子人源化抗體在畢赤酵母中的表達及ELISA試劑盒的研制.pdf

1、B淋巴細(xì)胞刺激因子(B cell activating factor belonging to the TNF famlly，BAFF)是腫瘤壞死因子(TNF)超家族的第十七位成員，有膜結(jié)合型和可溶型兩種形式。BAFF不僅參與調(diào)節(jié)B細(xì)胞增殖、分化及抗體的產(chǎn)生，而且還參與T細(xì)胞的活化和應(yīng)答過程。BAFF缺乏可導(dǎo)致免疫功能低下；而BAFF過表達則密切參與了同時涉及B、T淋巴細(xì)胞功能亢進的系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)及干燥綜

2、合征(SS)等多種自身免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展，而且血清中BAFF的水平與這些疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)；用抗BAFF抗體或其可溶性受體抑制BAFF的功能可緩解相關(guān)疾病的癥狀。因此，BAFF被認(rèn)為是治療這些自身免疫性疾病的理想靶標(biāo)。 第一部分：hBAFF全人源性基因工程抗體(scFv-Fc)在畢赤酵母中的表達、純化和活性分析 本研究利用基因重組技術(shù)構(gòu)建了B淋巴細(xì)胞刺激因子(BAFF)抗體基因(scFv-Fc)的真核表達載體pPIC

3、ZαA-scFv-Fc，并將此表達載體電轉(zhuǎn)入畢赤酵母菌KM71H中。用“yeast blot”方法篩選高表達菌株，優(yōu)化表達條件后大規(guī)模表達。親和層析方法純化抗體，每升菌液中得到純化抗體五十毫克左右。經(jīng)ELISA、western blotting和流式細(xì)胞等實驗檢測，抗體可以特異性地識別hBAFF。 第二部分：hBAFF酶聯(lián)免疫試劑盒的研制 本研究把分泌抗hsBAFF單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞接種到小鼠腹腔，收集腹水；制備抗原