人肥胖基因在畢赤酵母中的表達(dá).pdf

1、肥胖基因編碼的蛋白質(zhì)（leptin）是反映體內(nèi)脂肪含量和調(diào)節(jié)體重的重要信號(hào)因子，leptin能顯著降低脂肪組織數(shù)量、促進(jìn)青春期發(fā)育，對(duì)機(jī)體的免疫應(yīng)答、繁殖功能、神經(jīng)內(nèi)分泌等功能具有重要的作用。 本文根據(jù)已報(bào)道的人肥胖基因cDNA序列設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增出入肥胖基因的cDNA編碼序列，然后將此定向克隆至畢赤酵母分泌型表達(dá)載體pPIC9K的α因子信號(hào)肽編碼序列3'端，構(gòu)建成重組酵母表達(dá)載體，測(cè)序分析表明該cDNA序列由438個(gè)核苷酸

2、組成，編碼146個(gè)氨基酸組成的多肽。用化學(xué)方法轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115，經(jīng)PCR鑒定證實(shí)，目的基因整合到重組酵母菌染色體中，對(duì)重組酵母進(jìn)行G418篩選和4天的誘導(dǎo)表達(dá)，然后對(duì)陽(yáng)性克隆進(jìn)行了為期4天的誘導(dǎo)表達(dá)，SDS—PAGE未檢測(cè)到目的產(chǎn)物的表達(dá)。 根據(jù)巴斯德畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)的密碼子偏愛(ài)性，對(duì)肥胖基因進(jìn)行了簡(jiǎn)并改造和人工合成，然后將改造過(guò)的人肥胖基因以正確的讀碼框架插入到酵母分泌型表達(dá)載體pPIC9K的α因子信號(hào)肽編碼序列3'端，