廣藿香的抗補(bǔ)體化學(xué)成分研究.pdf

1、補(bǔ)體系統(tǒng)是人類自身免疫系統(tǒng)的一個(gè)重要組成部分，是由30余種廣泛存在于血清、組織液和細(xì)胞膜表面的蛋白質(zhì)組成的，具有精密調(diào)控機(jī)制的蛋白質(zhì)反應(yīng)系統(tǒng)，其活化過(guò)程表現(xiàn)為一系列絲氨酸蛋白酶的級(jí)聯(lián)酶解反應(yīng)。補(bǔ)體系統(tǒng)參與機(jī)體的特異性和非特異性免疫機(jī)制反應(yīng)，表現(xiàn)為抗微生物防御反應(yīng)，免疫調(diào)節(jié)及介導(dǎo)免疫病理的損傷性反應(yīng)。但是補(bǔ)體系統(tǒng)的非正常激活會(huì)引起人體免疫機(jī)制的過(guò)度反應(yīng)，會(huì)引起類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、老年癡呆、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、缺血性再灌注、急性肌梗死、急性呼吸窘迫

2、綜合癥等[1,2]。
　　廣藿香為唇形科刺蕊草屬植物廣藿香Pogostemon cablin(Blanco) Benth.的全草，具有芳香化濕、開胃止嘔、發(fā)表解暑的功效，是臨床常見的芳香化濕中藥，主治濕濁中阻、脘痞嘔吐、暑濕倦怠、胸悶不舒、寒濕閉暑、腹痛吐瀉、鼻淵頭痛等[3]。本課題組在前期對(duì)常用中藥的篩選過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)廣藿香的醇提物具有很強(qiáng)的補(bǔ)體抑制活性（CH50=0.017 mg·mL-1，AP50=0.46 mg·mL-1），

3、但迄今未見對(duì)廣藿香中抗補(bǔ)體活性成分的研究報(bào)道。為了進(jìn)一步探尋其抗補(bǔ)體活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，本課題以抗補(bǔ)體活性為導(dǎo)向，從廣藿香乙酸乙酯萃取部位、正丁醇萃取部位和石油醚部位大極性組分中分離鑒定了24個(gè)化合物。采用細(xì)胞溶血法測(cè)定了所有化合物對(duì)經(jīng)典和旁路途徑的抗補(bǔ)體活性，并選擇活性較強(qiáng)的槲皮素-7，3'，4'-三甲醚(7)和1β-OH-10βH-愈創(chuàng)木-4，11-二烯-3-酮(22)進(jìn)行了抗補(bǔ)體作用靶點(diǎn)研究。本課題對(duì)廣藿香抗補(bǔ)體活性成分的初步研究，為

4、廣藿香在治療補(bǔ)體過(guò)度激活相關(guān)疾病方面的應(yīng)用和開發(fā)提供了科學(xué)依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.抗補(bǔ)體活性部位的確定
　　采用體外細(xì)胞溶血法，考察了廣藿香不同萃取部位的抗補(bǔ)體活性。廣藿香提取的揮發(fā)油成分無(wú)活性，醇提物有較強(qiáng)的活性，其CH50為0.017 mg·mL-1。進(jìn)一步對(duì)醇提物進(jìn)行萃取，所得的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取部位的CH50分別為0.025 mg·mL-1、0.10 mg·mL-1、0.26 mg·mL-1，而水

5、提取物并無(wú)抗補(bǔ)體活性。對(duì)石油醚部位的進(jìn)一步的分析，發(fā)現(xiàn)石油醚部位的揮發(fā)性成分亦無(wú)活性，而去除揮發(fā)油后的大極性組分活性較強(qiáng)（CH50=0.026 mg·mL-1）。因此，確定乙酸乙酯萃取部位、正丁醇萃取部位以及石油醚部位大極性組分為廣藿香的抗補(bǔ)體活性部位。
　　2.活性部位的抗補(bǔ)體活性導(dǎo)向分離
　　以抗補(bǔ)體活性為導(dǎo)向，從乙酸乙酯部位活性較強(qiáng)的Fr.2(CH50=0.68mg·mL-1)、Fr.3(CH50=0.56 mg·mL

6、-1)、Fr.4(CH50=0.24 mg·mL-1)和Fr.6(CH50=0.55 mg·mL-1)4個(gè)組分中分離鑒定了17個(gè)化合物(1～17);從正丁醇部位活性較強(qiáng)的30％乙醇洗脫部位(CH50=0.32 mg·mL-1)分離鑒定了4個(gè)化合物(18～21);從石油醚部位的大極性組分活性較強(qiáng)的Fr.5(CH50=0.10 mg·mL-1)和Fr.6(CH50=0.029 mg·mL-1)2個(gè)組分中分離鑒定了3個(gè)化合物(22～24)。<

7、br>　　以上化合物包括黃酮類化合物15個(gè):5-羥基-3，7，3'，4'-四甲氧基黃酮(1)，5-羥基-7，3'，4'-三甲氧基-二氫黃酮(2)，5，4'-二羥基-3，3'，7'-三甲氧基黃酮(3)，5-羥基-3，7，4'-三甲氧基黃酮(4)，5，4'-二羥基-7，3'-二甲氧基黃酮(5)，木犀草素(6)，槲皮素-7，3'，4'-三甲醚(7)，岳樺素(8)，3，5，7-三羥基-3'，4'-二甲氧基黃酮(9)，槲皮素(10)，5，3'-二

8、羥基黃酮(11)，山柰酚(12)，5-羥基-7，3'，4'-三甲氧黃酮(13)，山柰酚-7-O-β-D-葡萄糖苷(14)，山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷-7-O-α-L-鼠李糖苷(15);萜類化合物3個(gè):齊墩果酸(16)，1β-OH-10βH-愈創(chuàng)木-4，11-二烯-3-酮(22)，(5R)-5-羥基-廣藿香醇(23);甾體類化合物2個(gè):β-谷甾醇(19)，β-胡蘿卜苷(20);酚酸類化合物2個(gè):香草酸(17)，對(duì)甲基芐醇(18);腺

9、苷類化合物1個(gè):脫氧腺苷(21);吡喃酮類雜環(huán)化合物1個(gè):4-甲基-6-異戊基-2-吡喃酮(24)。其中，化合物5、7、8、12、13、16、17、18、21、22和24均為首次從唇形科刺蕊草屬植物中分離得到。
　　3.單體成分的活性測(cè)定和靶點(diǎn)研究
　　通過(guò)細(xì)胞溶血實(shí)驗(yàn)，對(duì)所有的化合物進(jìn)行了經(jīng)典和旁路途徑的抗補(bǔ)體活性測(cè)試，發(fā)現(xiàn)化合物3、5、6、7、10、12、16、22、23和24這10個(gè)化合物對(duì)補(bǔ)體系統(tǒng)顯示了不同程度的抑制

10、活性(CH50:0.054～1.08 mg·mL-1; AP50:0.39～0.49mg·mL-1)。并對(duì)活性較強(qiáng)的槲皮素-3'，4'，7-三甲醚(7，CH50:0.072 mg·mL-1; AP50:0.48 mg·mL-1)和1β-OH-10βH-愈創(chuàng)木-4，11-二烯-3-酮(22，CH50:0.085 mg·mL-1;AP50:0.49 mg·mL-1)進(jìn)行了靶點(diǎn)作用的研究，結(jié)果表明化合物7主要作用于補(bǔ)體系統(tǒng)的C1q，C2，C5

11、和C9組分，而化合物22主要作用于補(bǔ)體系統(tǒng)的C1q，C2，C4、C5和C9組分。
　　4.廣藿香石油醚部位抗補(bǔ)體活性成分的GC-MS研究
　　對(duì)廣藿香石油醚部位的大極性組分進(jìn)行了GC-MS分析，通過(guò)與GC-MS譜庫(kù)比對(duì)，除化合物22～24外，又鑒定了10個(gè)成分(25～34)，包括長(zhǎng)鏈烷烴及其衍生物，羰基化合物、單萜類化合物和倍半萜類化合物，其中9個(gè)化合物為從廣藿香中新鑒定出的成分，并測(cè)定了各化合物的相對(duì)含量。
　　通過(guò)