人精子受精相關(guān)蛋白的研究.pdf

1、精子在受精過(guò)程中需要有多種精子膜蛋白參與。這些蛋白一方面通過(guò)精子膜跨膜信號(hào)傳導(dǎo)引起精子的頂體反應(yīng)，另一方面，也為精子穿過(guò)透明帶及精卵融合等提供必要的條件。同時(shí)，精漿作為射精后精子的生存環(huán)境，其組成成分與精子受精功能的相關(guān)性一直引人關(guān)注，特別是其中的一些蛋白分子通過(guò)與精子間相互作用，為精子后續(xù)的獲能、頂體反應(yīng)及受精提供了有力的保障。因此，對(duì)精子膜以及精漿中與受精相關(guān)蛋白的研究一直是生殖生物學(xué)和生殖醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。 本研究運(yùn)

2、用蛋白質(zhì)親合層析、雙向電泳和質(zhì)譜分析等技術(shù)成功分離出人精子膜ConA結(jié)合蛋白，并鑒定了其中的一個(gè)ConA結(jié)合蛋白——人鋅α2-糖蛋白(ZAG)。運(yùn)用免疫熒光和免疫印跡等方法對(duì)精子膜ZAG蛋白的功能研究中發(fā)現(xiàn)：ZAG在頂體反應(yīng)前、后精子上定位和含量都有很大的變化，精子頂體反應(yīng)后精子膜ZAG水平顯著下降。此外，發(fā)現(xiàn)兔抗人重組ZAG抗體可有效抑制精子頂體反應(yīng)，并能阻止精子穿透去透明帶倉(cāng)鼠卵細(xì)胞的作用，其機(jī)制是通過(guò)降低精子胞內(nèi)cAMP、PKA、

3、PKC和Ca2＋的水平予以實(shí)現(xiàn)。另一方面，最新研究發(fā)現(xiàn)，核糖核酸酶T2家族能通過(guò)與肌動(dòng)蛋白(actin)結(jié)合可抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移。而哺乳動(dòng)物精子的運(yùn)動(dòng)、頂體反應(yīng)與actin的功能密切相關(guān)。運(yùn)用原核生物表達(dá)體系克隆表達(dá)了RNaseT2重組蛋白，并成功制備抗重組蛋白多克隆抗體。免疫熒光和免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：人精子和精漿中存在一定量的RNaseT2，主要定位于精子頂體區(qū)、頸部、尾部，并且與精子中肌動(dòng)蛋白的定位有部分相似，尤其是在與精子