絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與人精子活動力的相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分：細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）和P38 MAPK表達(dá)水平與人精子活動力的相關(guān)性研究
　　 目的：比較細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）、P38絲裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)的磷酸化和蛋白表達(dá)水平在正常精子和弱精癥患者精子中的差異，旨在探討ERK和P38MAPK表達(dá)水平與精子活動力及密度的相關(guān)性。
　　 方法：研究對象來自解放軍105醫(yī)院不孕不育門診，患者常規(guī)禁欲3～7天，手淫法取精液于無菌杯中，液化后行常規(guī)檢查，

2、收集正常精液（精子密度≥20×106/ml，a≥25％或a+b≥50％）和弱精癥患者精液(精子密度≥20×106/ml，a+b≤40％)各20份，洗滌后提取精子總蛋白，采用免疫印跡（Western Blotting）方法分別檢測ERK、P38 MAPK的磷酸化和蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：ERK和P38MAPK在正常精子和弱精癥患者精子中均有表達(dá)，ERK蛋白表達(dá)水平和P38MAPK磷酸化水平在弱精癥患者組顯著升高（P＜0.05）

3、，而兩組間ERK磷酸化水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；兩組精子密度均與ERK、P38MAPK蛋白表達(dá)水平無明顯相關(guān)性(r1=0.086，r2=0.121，P均＞0.05)。
　　 結(jié)論：人精子ERK活性降低和P38 MAPK活性增高可能是精子活動力低下的原因之一；但ERK和P38 MAPK蛋白表達(dá)水平可能與精子發(fā)生無關(guān)。
　　 第二部分：絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）抑制劑對人精子活動力的影響及其作用機理
　

4、　 目的：探討細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）抑制劑PD98059和P38 MAPK抑制劑SB203580對精子活動力的影響及其作用機制。
　　 方法：研究對象來自解放軍105醫(yī)院不孕不育門診，患者常規(guī)禁欲3～7天，手淫法取精液于無菌杯中，液化后行常規(guī)檢查，分別收集正常精液（精子密度≥20×106/ml，a≥25％或a+b≥50％）和弱精癥患者精液(精子密度≥20×106/ml，a+b≤40％)各15份，洗滌后，調(diào)整精子密度，分別

5、在正常精子和弱精子癥精子中加入不同濃度的PD98059和SB203580，檢測不同作用時間精子活動力的變化，并采用免疫印跡（Western Blotting）法檢測抑制劑干預(yù)前后ERK和P38MAPK磷酸化水平的變化。
　　 結(jié)果：80μmol/LPD98059可顯著抑制正常精子活動力，以作用40min最為顯著；而60μmol/LSB203580則可顯著增加弱精子癥患者精子活動力，以作用10min時最為顯著；兩種抑制劑均可降低E

6、RK和P38MAPK的磷酸化水平。
　　 結(jié)論：PD98059和SB203580可分別通過阻斷ERK和P38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路而影響精子活動力，ERK和P38MAPK是調(diào)節(jié)精子活動力的重要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
　　 第三部分蛋白激酶C（PKC）對人精子活動力的影響及其作用機理
　　 目的：探討人精子蛋白激酶C（PKC）的表達(dá)水平對精子活動力的影響及其作用機理。
　　 方法：研究對象來自解放軍105醫(yī)院不孕不育

7、門診，患者常規(guī)禁欲3～7天，手淫法取精液于無菌杯中，液化后行精液常規(guī)檢查，分別收集30份正常精液（精子密度≥20×106/ml，a≥25％或a+b≥50％）和20份弱精子癥患者精液(精子密度≥20×106/ml，a+b≤40％)作為正常對照組和弱精癥組。標(biāo)本洗滌處理后采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測兩組精子PKCβⅠ含量；并將正常組精液經(jīng)密度梯度離心后，分別加入PKC激活劑PMA和抑制劑GF109203X，采用免疫印跡（Western Bl