VEGF、FGF-2在喉癌中的表達及臨床意義.pdf

1、目的：喉癌約占全身癌腫的1％-5％，在耳鼻咽喉的惡性腫瘤中，約占7.9％-35％。目前大量的基礎(chǔ)研究表明，血管的生成是實體腫瘤生長、發(fā)展、轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵。腫瘤微血管密度與其惡性表型及其生物學(xué)行為密切相關(guān)，如果沒有血管生成，大部分腫瘤處于休眠狀態(tài)，腫瘤維持微小狀態(tài)不會對人體產(chǎn)生生命威脅。而腫瘤組織微血管的生成是血管生長因子和抑制因子失衡造成的，隨著對腫瘤研究的深入，對血管生長因子和抑制因子的研究也越來越成為人們研究的熱點問題。血管內(nèi)皮生長因子

2、（VEGF）和堿性成纖維細(xì)胞生長因子（FGF-2）是血管生長因子中與腫瘤血管生成關(guān)系最密切的因子。
　　 VEGF和FGF-2是促進血管形成的重要因子，可以刺激內(nèi)皮細(xì)胞分泌集中蛋白酶和蛋白酶活化因子，從而導(dǎo)致血管基底膜的降解，細(xì)胞得以侵入周圍基質(zhì)，遷移、增殖，最終分化而形成一個新的、含有一個空腔的血管。大量研究表明VEGF和FGF-2與促進血管形成和促進腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。
　　 本研究應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測喉鱗狀細(xì)

3、胞癌組織中VEGF及FGF-2的表達，分析其中的相互關(guān)系，進一步探討血管因子與喉癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、惡化的關(guān)系，為腫瘤的基因治療提供新的思路和方法。
　　 方法：
　　 1.材料：取材于2006年11月-2008年10月白求恩國際和平醫(yī)院和滄州市中心醫(yī)院耳鼻咽喉-頭頸外科住院手術(shù)治療的原發(fā)喉癌患者的新鮮癌組織50例及相應(yīng)40例癌旁組織（距腫瘤邊緣0.5cm），另取非喉部腫瘤手術(shù)患者的喉腔粘膜組織10例作為正常對照。所有組織取

4、材后立即用70％酒精固定，4℃冷藏保存。
　　 2.方法：流式細(xì)胞術(shù)（FCM）
　　 一抗：兔抗人IgG型FGF-2抗體，鼠抗人IgG2a型VEGF抗體：二抗：羊抗鼠FITC-IgG抗體。單細(xì)胞懸液制備，細(xì)胞免疫熒光染色后，上機檢測。
　　 3.結(jié)果判定：VEGF及FGF-2表達的蛋白定量以熒光指數(shù)（FI）表示。公式如下：
　　 FI=試驗樣品的均道值/對照樣品的均道值
　　 均道值=logX-M

5、odox340
　　 陽性結(jié)果的判定：腫瘤組織的FI值大于正常組織的（）FI+2S為陽性，（）FI-2S為陰性。（VEGF以FI>1.28為陽性，F(xiàn)GF-2以FI>1.28為陽性）。
　　 4.統(tǒng)計方法：所有數(shù)據(jù)經(jīng)Excell數(shù)據(jù)庫整理，應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計軟件包進行方差分析，t、t’檢驗，x2檢驗，F(xiàn)isher精確計算和相關(guān)分析。以P≤0.05為差異在統(tǒng)計學(xué)上有顯著性意義，P≤0.01為差異在統(tǒng)計學(xué)上有非常顯著性意

6、義。
　　 結(jié)果：
　　 1.VEGF的表達
　　 VEGF在喉癌組織中的表達量（FI=1.34±0.12），及陽性表達率（62％）明顯高于癌旁組織（FI=0.94±0.12，12.5％）和正常喉粘膜組織（FI=1.00+0.14，0％），定量表達有非常顯著性意義（P=0.00）（P=0.0001），定性表達也有顯著性意義（P=0.002）（P=0.0002），喉癌組織中的表達量及陽性表達率均高于癌旁組織及正常喉

7、粘膜組織；癌旁組織與正常喉粘膜組織中的表達量及陽性表達率均無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.949，P=0.5714）。
　　 N+組喉癌組織中VEGF的表達量（FI=1.36±0.07）和陽性表達率（93.33％）與N0組（FI=1.1292±0.12，48.57％）相比，定量表達及陽性表達率均有明顯統(tǒng)計學(xué)顯著差異（t=7.11，P=0.000）（X2=8.9296，P=0.0028）；臨床Ⅰ、Ⅱ期組的喉癌組織中VEGF的表達量（FI=1

8、.13±0.12）及陽性表達率（43.75％）與臨床Ⅲ、Ⅳ期組（FI=1.3562±0.10，94.44％）相比，定量表達及陽性表達率均有明顯統(tǒng)計學(xué)差（t=6.084，P=0.00）（X2=10.5064，P=0.0012），臨床Ⅲ、Ⅳ期組的表達量和陽性表達率均明顯高于Ⅰ、Ⅱ期組。VEGF在臨床分型、性別、年齡中的表達量及陽性表達率均無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 2.FGF-2的表達
　　 FGF-2在喉癌組織中的表達量（FI=

9、1.28±0.08）及陽性表達率（68％）與癌旁組織（FI=0.91±0.14，15％）和正常喉粘膜組織（FI=1.00±0.07，0％）相比，定量表達均有非常顯著性差異（P=0.000，P=0.000），定性表達也有顯著差異（X2=25.2810，P<0.0001）（P=0.00007），喉癌組織中的表達量及陽性表達率均高于癌旁組織及正常喉粘膜組織；癌旁組織與正常喉粘膜組織中的表達量及陽性表達率均無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 有淋巴結(jié)

10、轉(zhuǎn)移（N+）組的喉癌組織中FGF-2的表達量（FI=1.215±0.32）和陽性表達率（100％）與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（N0）組（FI=1.09±0.25，54.29％）相比，定性表達在統(tǒng)計學(xué)上有非常顯著差異（t=7.11，P=0.000），N+組中FGF-2的表達量明顯高于N0組，但陽性表達率無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.0091）。臨床Ⅰ、Ⅱ期組的喉癌組織中FGF-2的表達量（FI=1.1349±0.19）及陽性表達率（50％）與臨床Ⅲ、Ⅳ期組（

11、FI=1.3562±0.26）（100％）相比，有統(tǒng)計學(xué)差異（t=6.084，P=0.000）（X2=13.2353，P=0.0003）。FGF-2在臨床分型、性別、年齡中的表達量及陽性表達率均無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 結(jié)論：
　　 1.VEGF、FGF-2在喉癌組織中的定量及定性表達明顯高于癌旁組織和正常喉粘膜組織，癌旁組織和正常喉粘膜組織的表達無差別。
　　 2.VEGF、FGF-2在喉癌組織中表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及