研究論文Endostatin、VEGF、FGF-2在喉癌中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、目的：喉癌約占全身癌腫的1％-5％，在耳鼻咽喉的惡性腫瘤中，約占7.9％-35％。目前大量的基礎(chǔ)研究表明，血管的生成是實體腫瘤生長、發(fā)展、轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵。腫瘤微血管密度與其惡性表型及其生物學(xué)行為密切相關(guān)，如果沒有血管生成，大部分腫瘤處于休眠狀態(tài)，腫瘤維持微小狀態(tài)不會對人體產(chǎn)生生命威脅。而腫瘤組織微血管的生成是血管生長因子和抑制因子失衡造成的，隨著對腫瘤研究的深入，對血管生長因子和抑制因子的研究也越來越成為人們研究的熱點問題。血管內(nèi)皮生長因子

2、(VEGF)和堿性成纖維細(xì)胞生長因子(FGF-2)是血管生長因子中與腫瘤血管生成關(guān)系最密切的因子，而內(nèi)皮抑素(Endostatin)是新近研究發(fā)現(xiàn)的最理想的血管抑制因子。 Endostatin基因是OReilly等在治療實體瘤研究中發(fā)現(xiàn)的一種蛋白質(zhì)，在生物學(xué)活性上，主要表現(xiàn)為抑制內(nèi)皮細(xì)胞增殖，并伴有誘導(dǎo)凋亡作用，而對非內(nèi)皮細(xì)胞無增殖抑制作用。國外學(xué)者已經(jīng)開始利用Endostatin進(jìn)行腫瘤臨床治療研究，各種研究顯示它有良好的臨床

3、應(yīng)用前景。 VEGF和FGF-2是促進(jìn)血管形成的重要因子，可以刺激內(nèi)皮細(xì)胞分泌集中蛋白酶和蛋白酶活化因子，從而導(dǎo)致血管基底膜的降解，細(xì)胞得以侵入周圍基質(zhì)，遷移、增殖，最終分化而形成一個新的、含有一個空腔的血管。大量研究表明VEGF和FGF-2與促進(jìn)血管形成和促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。 本研究應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測喉鱗狀細(xì)胞癌組織中Endostatin、VEGF及FGF-2的表達(dá)，分析其中的相互關(guān)系，進(jìn)一步探討血管因子與

4、喉癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、惡化的關(guān)系，為腫瘤的基因治療提供新的思路和方法。 方法： 1材料取材于2003年11月-2004年11月，河北醫(yī)科大學(xué)附屬第四醫(yī)院耳鼻咽喉—頭頸外科住院手術(shù)治療的原發(fā)喉癌患者的新鮮癌組織50例及相應(yīng)40例癌旁組織(距腫瘤邊緣0.5cm)，另取非喉部腫瘤手術(shù)患者的喉腔粘膜組織10例作為正常對照。所有組織取材后立即用70％酒精固定，4℃冷藏保存。 2方法流式細(xì)胞術(shù)(FCM) 一抗：兔抗人Ig

5、G型Endostatin抗體：兔抗人IgG型FGF-2抗體，鼠抗人IgG2a型VEGF抗體：二抗：羊抗鼠FITC-IgG抗體。單細(xì)胞懸液制備，細(xì)胞免疫熒光染色后，上機(jī)檢測。 3結(jié)果判定Endostatin、VEGF及FGF-2表達(dá)的蛋白定量以熒光指數(shù)(FI)表示。公式如下： FI=試驗樣品的均道值/對照樣品的均道值均道值=logX-Modo×340陽性結(jié)果的判定：腫瘤組織的FI值大于正常組織的(-X)FI±2S為陽性，反

6、之為陰性。(Endostatin以FI＞1.10為陽性，VEGF以FI＞1.28為陽性，F(xiàn)GF-2以FI＞1.28為陽性)。 4統(tǒng)計方法 所有數(shù)據(jù)經(jīng)Excell數(shù)據(jù)庫整理，應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行方差分析，t、t'檢驗，x2檢驗，F(xiàn)isher精確計算和相關(guān)分析。以P≤0.05為差異在統(tǒng)計學(xué)上有顯著性意義，P≤0.01為差異在統(tǒng)計學(xué)上有非常顯著性意義。 結(jié)果： 1Endostatin的表達(dá)

7、 Endostatin在喉癌組織中的表達(dá)量(FI=1.32)及陽性表達(dá)率(52％)與癌旁組織(FI=0.90，27.5％)和正常喉粘膜組織(FI=1.00，10％)相比，定量表達(dá)均有非常顯著性差異(P=0.00)(P=0.012)，定性表達(dá)也有顯著差異(x2=5.5097，P=0.019)(x2=4.3636，P=0.0367)，喉癌組織中的表達(dá)量及陽性表達(dá)率均高于癌旁組織及正常喉粘膜組織；癌旁組織與正常喉粘膜組織中的表達(dá)量及陽性表達(dá)率

8、均無統(tǒng)計學(xué)差異。 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(N+)組的喉癌組織中Endostatin的表達(dá)量(FI=1.21)和陽性表達(dá)率(86.67％)與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(N0)組(FI=0.99，37.14％)相比，定量表達(dá)在統(tǒng)計學(xué)上有非常顯著差異(t=8.22，P=0.000)。臨床Ⅰ、Ⅱ期組的喉癌組織中Endostatin的表達(dá)量(FI=0.98)及陽性表達(dá)率(50％)與臨床Ⅲ、Ⅳ期組(FI=1.20，83.33％)相比，定量表達(dá)及陽性表達(dá)率均有明顯統(tǒng)

9、計學(xué)差異(t=8.468，P=0.000)(X2=5.4329，P=0.0198)。臨床Ⅲ、Ⅳ期組的表達(dá)量和陽性表達(dá)率均明顯高于Ⅰ、Ⅱ期組。Endostatin在臨床分型、性別、年齡中的表達(dá)量及陽性表達(dá)率均無統(tǒng)計學(xué)差異。 2VEGF的表達(dá) VEGF在喉癌組織中的表達(dá)量(FI=1.34)及陽性表達(dá)率(62％)與癌旁組織(FI=0.94，12.5％)和正常喉粘膜組織(FI=1.00，0％)間均有非常顯著性差異(P=0.00)

10、(X2=22.6875，P＜0.0001)(P=0.002)(P=0.0002)，喉癌組織中的表達(dá)量及陽性表達(dá)率均低于癌旁組織及正常喉粘膜組織；癌旁組織與正常喉粘膜組織中的表達(dá)量及陽性表達(dá)率均無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.949，P=0.5714)。 N+組喉癌組織中VEGF的表達(dá)量(FI=1.36)和陽性表達(dá)率(93.33％)與N0組(FI=1.1292，48.57％)相比，定量表達(dá)及陽性表達(dá)率均有明顯統(tǒng)計學(xué)顯著差異(t=7.11，P

11、=0.000)(X2=8.9296，P=0.0028)；臨床Ⅰ、Ⅱ期組的喉癌組織中VEGF的表達(dá)量(FI=1.13)及陽性表達(dá)率(43.75％)與臨床Ⅲ、Ⅳ期組(FI=1.3562，94.44％)相比，定量表達(dá)及陽性表達(dá)率均有明顯統(tǒng)計學(xué)差(t'6.084，P=0.00)(X2=10.5064，P=0.0012)，臨床Ⅲ、Ⅳ期組的表達(dá)量和陽性表達(dá)率均明顯高于Ⅰ、Ⅱ期組。VEGF在臨床分型、性別、年齡中的表達(dá)量及陽性表達(dá)率均無統(tǒng)計學(xué)差異。

12、 3FGF-2的表達(dá) FGF-2在喉癌組織中的表達(dá)量(FI=1.28)及陽性表達(dá)率(68％)與癌旁組織(FI=0.91，15％)和正常喉粘膜組織(FI=1.00，0％)相比，定量表達(dá)均有非常顯著性差異(P=0.000，P=0.000)，定性表達(dá)也有顯著差異(X2=25.2810，P＜0.0001)(P=0.00007)，喉癌組織中的表達(dá)量及陽性表達(dá)率均高于癌旁組織及正常喉粘膜組織；癌旁組織與正常喉粘膜組織中的表達(dá)量及陽性表

13、達(dá)率均無統(tǒng)計學(xué)差異。 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(N+)組的喉癌組織中FGF-2的表達(dá)量(FI=1.215)和陽性表達(dá)率(100％)與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(N0)組(FI=1.09，54.29％)相比，定性表達(dá)在統(tǒng)計學(xué)上有非常顯著差異(t=7.11，P=0.000)，N+組中FGF-2的表達(dá)量明顯高于N0組，但陽性表達(dá)率無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.0091)。臨床Ⅰ、Ⅱ期組的喉癌組織中FGF-2的表達(dá)量(FI=1.1349)及陽性表達(dá)率(50％)與臨床Ⅲ、

14、Ⅳ期組(FI=1.3562)(100％)相比，有統(tǒng)計學(xué)差異(t=6.084，P=0.000)(X2=13.2353，P=0.0003)。FGF-2在臨床分型、性別、年齡中的表達(dá)量及陽性表達(dá)率均無統(tǒng)計學(xué)差異。 4Endostatin、VEGF和FGF-2在喉癌組織中的表達(dá)的相關(guān)性 以Endostatin的表達(dá)量為自變量，以VEGF和FGF-2的表達(dá)為因變量，進(jìn)行相關(guān)分析，無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： 1.Endo

15、statin在喉癌組織中的定量及定性表達(dá)明顯高于癌旁組織和正常粘膜組織，癌旁組織和正常粘膜組織的表達(dá)無差別。 2.VEGF、FGF-2在喉癌組織中的定量及定性表達(dá)明顯高于癌旁組織和正常粘膜組織，癌旁組織和正常粘膜組織的表達(dá)無差別。 3.Endostatin在喉癌組織中表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期有關(guān)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和臨床Ⅲ、Ⅳ期組中的定量及定性表達(dá)分別高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和臨床Ⅰ、Ⅱ期組；但表達(dá)與臨床分型、患者年齡及患者性別無