γ-氨基丁酸B型受體對(duì)糖尿病神經(jīng)痛合并抑郁大鼠海馬腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響.pdf

1、目的:糖尿病神經(jīng)痛(diabetic neuropathic pain，DNP)是糖尿病的常見(jiàn)并發(fā)癥之一，而在糖尿病患者中，神經(jīng)痛合并抑郁的發(fā)病率也逐漸增加，并嚴(yán)重影響糖尿病人的生活。糖尿病患者抑郁發(fā)病率可達(dá)到普通人群的1.6-2.0倍，其中2型糖尿病抑郁發(fā)病率更高達(dá)13％。糖尿病神經(jīng)痛合并抑郁的形成機(jī)制是非常復(fù)雜的，目前已知中樞γ-氨基丁酸B型受體（GABAB受體）的表達(dá)變化在其形成中發(fā)揮重要作用，GABAB受體的激動(dòng)劑和拮抗劑均被證

2、實(shí)具有抗抑郁作用，但其具體機(jī)制尚不清楚，探討其機(jī)制可為臨床治療提供更好的研究方向。
　　GABAB受體在神經(jīng)系統(tǒng)廣泛分布，調(diào)控突觸傳遞，其中中樞GABAB受體與許多神經(jīng)系統(tǒng)疾病密切相關(guān)，包括抑郁、焦慮、藥物成癮、疼痛、癲癇等。巴氯芬作為GABAB受體的特異性激動(dòng)劑，具有明顯的鎮(zhèn)痛作用，且近年研究顯示其具有顯著的抗抑郁作用，GABAB受體抑制劑CGP55845也可產(chǎn)生抗抑郁作用。研究發(fā)現(xiàn):各種原因?qū)е碌哪X源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子(BDNF)

3、的減少易誘發(fā)抑郁，而大腦BDNF水平的升高可產(chǎn)生抗抑郁效果，這表明BDNF與抑郁形成密切相關(guān)。但是GABAB受體的表達(dá)變化是否通過(guò)影響B(tài)DNF的表達(dá)而參與抑郁的形成，目前尚不清楚。
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)，結(jié)合強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)，制備糖尿病神經(jīng)痛合并抑郁大鼠模型，模型制備成功后給予GABAB受體激動(dòng)劑（巴氯芬）和拮抗劑(CGP55845)。通過(guò)觀察正常對(duì)照組（C組）、糖尿病神經(jīng)痛合并抑郁模型(D1組)、巴氯芬組（D2

4、組）、CGP55845組(D3組)、CGP55845+巴氯芬組(D4組)的50％機(jī)械縮足閾值(PWT)，強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間(IMSFT)變化，采用免疫組織化學(xué)法和分子生物學(xué)方法比較各組大鼠海馬組織BDNF的表達(dá)變化，從而觀察GABAB受體對(duì)糖尿病神經(jīng)痛合并抑郁大鼠海馬BDNF表達(dá)的影響，探討其在抗抑郁方面的作用及其機(jī)制。
　　方法:清潔級(jí)雄性SD大鼠30只，180～200g，3～4周，由河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，隨機(jī)分為兩組

5、，正常對(duì)照組（C組）10只和糖尿病神經(jīng)痛模型組（D組）20只，分別腹腔注射生理鹽水或鏈脲佐霉素(STZ,60 mg/kg)。D組于腹腔注射后2周末測(cè)定空腹血糖濃度，空腹血糖濃度＞16.7mmol/L的大鼠為糖尿病模型制備成功，然后對(duì)糖尿病大鼠進(jìn)行15min/次（1次/周）強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)以制備抑郁模型，其方法為:將大鼠單獨(dú)放入高40 cm、直徑20cm的圓柱形玻璃缸中，缸內(nèi)水深25 cm，水溫(25±2)℃，從大鼠入水后計(jì)時(shí)15min，為避

6、免相互影響，每只大鼠進(jìn)行強(qiáng)迫游泳之前更換玻璃缸中的水。于腹腔注射后3周末利用Von Frey針測(cè)定大鼠機(jī)械縮足閾值，采用Dixon方法計(jì)算出50％縮足閾值(PawWithdraw Threshold，PWT)，PWT＜4g且空腹血糖濃度＞16.7mmol/L的大鼠為糖尿病神經(jīng)痛模型制備成功。C組和D組大鼠，通過(guò)強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)記錄其5min累計(jì)不動(dòng)時(shí)間(immobility time of forced swimming test，IMFS

7、T:入水后計(jì)時(shí)5min，大鼠在水中停止掙扎，或顯示漂浮狀態(tài)，或僅做一些必要的輕微動(dòng)作保持頭部浮在水面上的時(shí)間視為不動(dòng)時(shí)間），每只大鼠進(jìn)行強(qiáng)迫游泳之前更換玻璃缸中的水。與C組大鼠比較，D組大鼠IMFST顯著延長(zhǎng)則預(yù)示DNP合并抑郁模型可能制備成功，為驗(yàn)證模型制備成功，在行為學(xué)(PWT及IMFST)測(cè)定結(jié)束后，取C組和D組大鼠海馬組織，免疫組織化學(xué)法和分子生物學(xué)方法測(cè)定其BDNF的表達(dá)變化，將行為學(xué)與分子生物學(xué)變化相結(jié)合，確定模型大鼠制備的

8、行為學(xué)(PWT及IMFST)條件，為下一步成功制備DNP合并抑郁大鼠的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷於ɑA(chǔ)。
　　根據(jù)上一步實(shí)驗(yàn)確定的糖尿病神經(jīng)痛合并抑郁大鼠制備條件，成功制備模型大鼠80只（D組），正常對(duì)照組（C組）大鼠20只，均行鞘內(nèi)置管，觀察兩天未出現(xiàn)神經(jīng)癥狀(成功率100％)。根據(jù)鞘內(nèi)給藥(共20μl)不同將D組大鼠隨機(jī)分為四組(n=20): D1組:生理鹽水10μl+生理鹽水10μl; D2組:巴氯芬05μg十生理鹽水10μl; D3組:C

9、GP5584510μg十生理鹽水10μl; D4組:CGP5584510μg十巴氯芬0.5μg;而同周齡C組大鼠鞘內(nèi)給予生理鹽水10μl十生理鹽水10μl。五組大鼠2次鞘內(nèi)注藥間隔15min，連續(xù)4d，分別于第4d給藥完成后2h(T1)、給藥完成后2周（T2）測(cè)定PWT和IMFST，并在T1、T2時(shí)間點(diǎn)每組大鼠取10只海馬組織，采用免疫組織化學(xué)法和分子生物學(xué)方法測(cè)定BDNF表達(dá)變化。
　　結(jié)果:與C組相比，D組各時(shí)間點(diǎn)PWT明顯降

10、低(P＜0.05)，IMFST明顯延長(zhǎng)(P＜0.05)，BDNF陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少(P＜0.05)，其mRNA及蛋白表達(dá)顯著下降(P＜0.05)。與D1組比較，D2、D3組大鼠各時(shí)間點(diǎn)IMFST明顯縮短(P＜0.05)、BDNF表達(dá)明顯增多(P＜0.05)，D2組大鼠各時(shí)間點(diǎn)PWT顯著升高(P＜0.05)，而D3組PWT無(wú)明顯變化(P＞0.05);D4組與D1組相比，各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)顯著變化(P＞0.05)。上述各組指標(biāo)T1與T2時(shí)間點(diǎn)相比均無(wú)明