茶樹油藥理作用的實驗研究.pdf

1、茶樹油(teatreeoil，TTO)是從桃金娘科白干層屬植物——互葉白干層茶樹(Melaleucaalternifolia)中提取的香精油。有文獻報道TTO是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最有效的天然抗菌劑之一。TTO其他的抗微生物活性和抗炎活性也陸續(xù)見諸報道。TTO的應用研究和開發(fā)在國外主要是在澳大利亞已經(jīng)取得了一些實質(zhì)性的成果，在制藥、日化和食品等行業(yè)都得到一定程度的應用，并取得了良好的社會效益和經(jīng)濟效益。國內(nèi)某地區(qū)于1999年從澳大利亞引進良種

2、茶樹進行種植。在國家計委示范工程項目支持下，將形成5萬畝種植基地，6000萬株種苗及年產(chǎn)500噸TTO示范生產(chǎn)能力。由于國內(nèi)種植地氣候、土壤條件等環(huán)境因素與澳大利亞沿海地區(qū)存在較大差異，茶樹的生長必然會受到相應的影響，從這些茶樹中蒸餾出的TTO成分發(fā)生了一定程度的變化，進而可能會導致TTO的活性和作用特點發(fā)生相應變化。所以，有必要觀察和驗證國產(chǎn)TO的抗微生物和抗炎作用，以了解其抗微生物活性和抗炎活性的變化情況，為其抗微生物和抗炎制品的研

3、究與開發(fā)提供必要的理論依據(jù)和相關信息。 第一部分茶樹油抗菌活性的實驗研究目的觀察白色念珠菌、耐藥金黃色葡萄球菌、枯草桿菌及芽胞、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌和痢疾志賀菌對國產(chǎn)TTO的敏感性，驗證國產(chǎn)TTO的抗菌活性。方法在液體稀釋法敏感試驗中，各種細菌、真菌和細菌芽胞分別與不同濃度TTO溶液混合后接種到普通肉湯培養(yǎng)基中，觀察培養(yǎng)結果。取少量培養(yǎng)物分別接種到肉湯和普通瓊脂平板中進行再次培養(yǎng)，繼續(xù)觀察培養(yǎng)結果，了解TTO在試驗中對各種微

4、生物的殺滅和抑制作用；在紙片瓊脂擴散法中，觀察不同濃度TTO紙片對各種細菌產(chǎn)生的抑菌圈。 結果≥1％(v/v)的TTO對銅綠假單胞菌有很好的抗菌活性；≥0.5％(v/v)的TO對白色念珠菌和其他各種細菌都顯示出很好的殺滅和抑制作用；0.25％(v/v)的TO對痢疾志賀菌和0.125％(v/v)的TO對枯草桿菌及其芽胞仍有明顯的抗菌作用。各濃度TTO紙片只對枯草桿菌產(chǎn)生抑菌圈。結論國產(chǎn)TTO對試驗中的真菌、細菌及芽胞有明顯的殺滅作

5、用和持久的抑制作用，其抗微生物活性并未出現(xiàn)顯著變化。 第二部分茶樹油滅活脊髓灰質(zhì)炎病毒的實驗觀察目的觀察TTO水溶液對脊髓灰質(zhì)炎病毒(Poliovirus，PV)的殺滅效果，認識TTO對PV病毒的消毒能力，進一步了解TTO的抗病毒活性和初步評估將TTO開發(fā)成為消毒產(chǎn)品或外用抗病毒藥物的可行性。方法根據(jù)衛(wèi)生部頒布的《消毒技術規(guī)范》，采用細胞感染法，觀察細胞病理變化(CPE)以了解TTO、中和劑及中和產(chǎn)物對PV和HepG2細胞的影響

6、，評價中和劑是否合格；通過計算半數(shù)細胞感染劑量(TCID50)，測定病毒與各濃度TTO溶液作用前后感染細胞的滴度，評價TTO溶液對PV的消毒效果和抗病毒作用。結果0.5％TTO作用40mins和60mins能分別滅活PV4.33log10和5.5log10；1.0％TTO作用40mins和60mins能分別滅活PV5.33log10和5.5log10。結論國產(chǎn)TTO對懸液中的PV有明顯的殺滅作用和很好的消毒效果，國產(chǎn)TTO應用于消毒產(chǎn)品

7、極具開發(fā)潛力。 第三部分茶樹油抗炎活性的實驗研究目的從量效和時效關系上觀察進口和國產(chǎn)TTO水溶液對LPS激活RAW264.7細胞分泌TNF-α的抑制效果，了解兩種TTO的抗炎效果并比較兩者抗炎活性差異。方法通過四唑鹽(MTT)比色試驗篩選出對細胞無毒性作用的TTO溶液濃度；各濃度TTO水溶液預處理RAW264.7細胞后，測定LPS激活RAW264.7細胞釋放TNF-α的濃度，并篩選出抑制作用最明顯的TTO濃度；將此濃度TTO預處

8、理RAW264.7細胞不同時間，測定LPS激活RAW264.7細胞釋放TNF-α的濃度。結果0.001-0.00025％國產(chǎn)和進口TTO對RAW264.7細胞無細胞毒性；0.001-0.000125％進口TTO各濃度組均能很好抑制LPS誘導RAW264.7釋放TNF-a，尤其以0.00025％進口TTO的抑制作用最為明顯，抑制率達66.1％；國產(chǎn)TTO前三個濃度組對LPS誘導RAW264.7釋放TNF-a有很好的抑制作用，尤其以0.00