間歇性冷暴露提高機(jī)體抗寒能力的研究.pdf

1、研究背景:
　　寒冷是常見的環(huán)境因素，當(dāng)機(jī)體暴露于寒冷環(huán)境時(shí)，若防護(hù)措施不當(dāng)或暴露時(shí)間過長便會(huì)對(duì)機(jī)體造成損傷，影響健康，甚至威脅生命。寒冷可以顯著降低人的勞動(dòng)能力。對(duì)于軍隊(duì)而言，寒冷環(huán)境的暴露可能嚴(yán)重削弱部隊(duì)的戰(zhàn)斗力。因此，研究寒冷對(duì)人體的損傷機(jī)制和防護(hù)措施，無論對(duì)保護(hù)人民的生產(chǎn)作業(yè)能力，還是提高部隊(duì)寒冷環(huán)境下的戰(zhàn)斗力都至關(guān)重要。
　　我們實(shí)驗(yàn)室以往研究發(fā)現(xiàn)PI3K-Akt調(diào)控通路參與急性冷暴露時(shí)肝臟能量代謝和損傷的發(fā)生，但

2、其機(jī)制還尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)急性冷暴露環(huán)境下肝臟損傷的機(jī)理加以探討，同時(shí)通過模擬現(xiàn)實(shí)生活規(guī)律建立冷適應(yīng)動(dòng)物模型，探討冷適應(yīng)對(duì)機(jī)體提高寒冷耐受能力和肝臟耐受急性冷暴露損傷的機(jī)制，為以后采取提高機(jī)體的防護(hù)措施提供依據(jù)。
　　研究目的:
　　研究間歇性冷暴露提高機(jī)體抗寒能力及其可能機(jī)制。
　　研究方法:
　　1.建立急性冷暴露引起肝損傷的動(dòng)物模型，通過模擬現(xiàn)實(shí)作業(yè)規(guī)律進(jìn)行間歇性冷暴露建立冷適應(yīng)動(dòng)物模型。
　　2

3、.通過TUENL染色的方法研究大鼠肝細(xì)胞凋亡情況，利用線粒體提取試劑盒提取線粒體，根據(jù)JC-1發(fā)光原理檢測線粒體膜電位。
　　3.采用透射電鏡方法觀察冷暴露對(duì)大鼠肝臟超微結(jié)構(gòu)的影響。
　　4.利用Western blot方法研究冷暴露對(duì)線粒體融合相關(guān)蛋白、Caspase3的表達(dá)水平及Akt和ERK磷酸化水平的影響。
　　研究結(jié)果:
　　1.在急性冷暴露過程中，隨著暴露時(shí)間的延長，大鼠中心體溫逐漸降低；在暴露4h時(shí)

4、，中心體溫顯著降低，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶升高，肝功能受損。
　　2.通過對(duì)大鼠肝臟細(xì)胞凋亡檢測發(fā)現(xiàn)急性冷暴露4h后大鼠肝細(xì)胞的凋亡水平顯著增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；隨著冷暴露時(shí)間的增加，大鼠肝臟內(nèi)Caspase3活性逐漸增加。
　　3.對(duì)線粒體膜電位檢測發(fā)現(xiàn)，急性冷暴露4h時(shí)，大鼠肝臟線粒體膜電位較對(duì)照組降低；透射電鏡結(jié)果顯示急性冷暴露4h后大鼠肝臟線粒體透光度增加，腫脹明顯，小線粒體較多；Wentern

5、blot檢測結(jié)果顯示大鼠肝細(xì)胞線粒體融合蛋白mfn1/2在在冷暴露1h較對(duì)照組升高，但隨著暴露時(shí)間延長而顯著下降；ERK磷酸化水平隨著冷暴露時(shí)間的增加逐漸降低；Akt的磷酸化水平在冷暴露1h時(shí)較對(duì)照有一過性增加，之后逐漸降低，在4h時(shí)顯著低于對(duì)照組。
　　4.冷適應(yīng)大鼠接受急性冷暴露時(shí)，中心體溫下降程度較單純急性冷暴露組顯著降低（p<0.01）；其肝臟細(xì)胞凋亡數(shù)量也較急性冷暴露組減少（p<0.05），ERK和Akt磷酸化水平以及線