慢性間歇性低壓低氧抗IgA腎病作用的研究.pdf

1、近年來(lái)大量研究表明，慢性間歇性低壓低氧（CIHH）對(duì)人體免疫異常性疾病具有改善作用，可促進(jìn)變態(tài)反應(yīng)性疾病患者免疫功能的穩(wěn)定和恢復(fù)，對(duì)兒童支氣管哮喘、成人過(guò)敏性皮炎及自身免疫性甲狀腺炎等具有緩解甚至治愈作用。我室的研究顯示，CIHH可對(duì)抗急性低氧所致的免疫功能失調(diào)，有效預(yù)防大鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)生，減輕其關(guān)節(jié)組織滑膜炎癥反應(yīng)和病理?yè)p傷，具有免疫調(diào)節(jié)作用?；谝陨蟿?dòng)物和人體的實(shí)驗(yàn)研究都已證實(shí)CIHH具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用，可能對(duì)機(jī)體的

2、免疫相關(guān)性損傷具有治療和保護(hù)作用。IgA腎病是最常見(jiàn)的腎小球疾病。本病在亞洲和太平洋地區(qū)高發(fā)，在我國(guó)其發(fā)病率約占原發(fā)性腎小球疾病的30％。IgAN的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，現(xiàn)有資料表明其發(fā)病與先天或獲得性免疫調(diào)節(jié)異常有關(guān)。由于病毒、細(xì)菌等對(duì)呼吸道或消化道的刺激，使粘膜IgA合成增多。IgA或含IgA的免疫復(fù)合物在系膜區(qū)沉積，引起系膜細(xì)胞增殖，造成腎小球炎性損傷，是一種典型的自身免疫性慢性疾病。IgAN時(shí)，B淋巴細(xì)胞活化因子、IL-4水平異

3、常升高，這些細(xì)胞因子均參與IgAN的發(fā)病及進(jìn)展過(guò)程。由于發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，目前尚沒(méi)有針對(duì)IgAN的特異性治療措施。如何早期干預(yù)治療是目前IgAN治療研究的熱點(diǎn)和焦點(diǎn)。本研究旨在通過(guò)建立IgAN動(dòng)物模型、給予CIHH處理，利用功能學(xué)、形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)等方法，從動(dòng)物整體、離體組織及細(xì)胞不同水平，系統(tǒng)動(dòng)態(tài)地觀察CIHH處理對(duì)IgA腎病的保護(hù)作用，并探討其可能機(jī)制。本研究分為三個(gè)部分：
　　第一部分：IgAN大鼠模型的建立。
　　目的

4、：建立并全面評(píng)估大鼠IgAN模型的可靠性和穩(wěn)定性。
　　方法：健康雄性Wistar大鼠60只，隨機(jī)分為對(duì)照組（Control組，n=30）和模型組（IgAN組，n=30）。采用牛血清白蛋白（BSA）+蓖麻油+四氯化碳（CCl4）+脂多糖（LPS）的復(fù)合造模方法建立實(shí)驗(yàn)性IgAN大鼠模型。BSA400mg/kg隔天灌胃，連續(xù)8周；CCl40.1ml+蓖麻油0.3ml皮下注射，每周1次，連續(xù)8周；第6周和第8周尾靜脈注射脂多糖（LPS

5、）0.05mg。Control組以4 ml/kg蒸餾水代替牛血清白蛋白（BSA），用0.4毫升蓖麻油取代蓖麻油和CCl4，采用生理鹽水代替LPS，給藥方法與IgAN組相同。建模過(guò)程中應(yīng)用ELISA、免疫熒光染色等方法動(dòng)態(tài)觀測(cè)動(dòng)物血、尿生化指標(biāo)，血清IgA水平，腎組織形態(tài)學(xué)改變及IgA沉積等情況。
　　結(jié)果：⑴IgAN組大鼠自實(shí)驗(yàn)第4周出現(xiàn)血尿和蛋白尿，血尿素氮及肌酐水平升高，至第8周顯著高于Control組（P<0.05）。IgA

6、N大鼠臨床表現(xiàn)與人類(lèi)IgAN相似。⑵IgAN組大鼠自實(shí)驗(yàn)第4周血清IgA水平升高，腎組織IgA免疫熒光檢測(cè)顯示腎小球系膜區(qū)IgA沉積，至第8周顯著高于同時(shí)間點(diǎn)的Control組（P<0.05）。IgAN大鼠免疫異常與人類(lèi)IgAN相似。⑶IgAN組大鼠自實(shí)驗(yàn)第4周出現(xiàn)腎小球系膜區(qū)腫脹等炎性改變，系膜細(xì)胞增生，雙重免疫熒光實(shí)驗(yàn)證實(shí)至第8周系膜細(xì)胞顯著增生。IgAN大鼠腎組織病理改變與人類(lèi)IgAN相似。
　　結(jié)論：應(yīng)用復(fù)合方法建立的Ig

7、AN大鼠模型從臨床表現(xiàn)、腎臟病理學(xué)改變、可能發(fā)病機(jī)制等方面均可部分模擬人類(lèi)IgAN的發(fā)病情況，是目前較為理想的IgAN動(dòng)物模型。此模型符合實(shí)驗(yàn)研究要求，能為進(jìn)一步研究IgAN的發(fā)病機(jī)制及治療措施提供基礎(chǔ)研究平臺(tái)。
　　第二部分：5000米海拔慢性間歇性低壓低氧抗IgA腎病作用的研究。
　　目的：觀察模擬5000米海拔高度CIHH對(duì)IgAN的影響及其可能機(jī)制。
　　方法：雄性Wistar大鼠48只，隨機(jī)分為4組：對(duì)照組(

8、Control，n=12）、CIHH處理組（CIHH，n=12）、IgA腎病組（IgAN，n=12）和IgAN并接受間歇性低壓低氧處理組（IgAN+CIHH，n=12）。IgAN組和IgAN+CIHH組大鼠進(jìn)行IgAN模型建立。Control組和Control+CIHH接受對(duì)照用藥，與造模動(dòng)物平行飼養(yǎng)。造模8周，經(jīng)相應(yīng)檢測(cè)確認(rèn)模型可靠后，Control+CIHH和IgAN+CIHH組大鼠接受模擬5000米海拔低壓低氧環(huán)境，每天6小時(shí)，持

9、續(xù)28天的CIHH適應(yīng)處理。Control組和IgAN組大鼠置于常氧環(huán)境中平行飼養(yǎng)。觀測(cè)指標(biāo)同第一部分。并利用Western Blot法測(cè)定大鼠腎臟組織中IgA沉積水平，利用ELISA法測(cè)定大鼠血清BAFF和IL-4水平。
　　結(jié)果：⑴海拔5000米CIHH處理4周后，與IgAN組大鼠相比， IgAN+CIHH組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)及尿蛋白均明顯降低（P＜0.05），血肌酐及尿素氮水平降低（P＜0.05）。⑵海拔5000米CIHH處理

10、4周后，與IgAN組大鼠相比，IgAN+CIHH組大鼠血清IgA水平降低（P＜0.05），腎組織IgA免疫熒光及Western Blot實(shí)驗(yàn)顯示腎小球系膜區(qū)IgA沉積減少（P＜0.05）。⑶海拔5000米CIHH處理4周后，與IgAN組大鼠相比，IgAN+CIHH組大鼠腎小球炎性改變減輕，雙重免疫熒光顯示系膜細(xì)胞增生減少。⑷海拔5000米CIHH處理4周后，與IgAN組大鼠相比，IgAN+CIHH組大鼠血清BAFF水平降低（P＜0.05

11、）。但海拔5000米CIHH對(duì)IgAN組大鼠血清IL-4的升高無(wú)影響（P>0.05）。
　　結(jié)論：模擬5000米海拔的CIHH對(duì)IgAN具有一定的治療作用，主要表現(xiàn)為緩解臨床癥狀、改善腎功能和減輕腎臟病理?yè)p傷。CIHH的抗IgAN作用可能與其降低血清BAFF水平，調(diào)節(jié)B細(xì)胞免疫，減少B細(xì)胞過(guò)度活化有關(guān)。
　　第三部分：3000米海拔慢性間歇性低壓低氧抗IgA腎病作用的研究。
　　目的：觀察模擬3000米海拔高度的CIH

12、H對(duì)IgAN的影響及可能作用機(jī)制。
　　方法：動(dòng)物分組與第二部分類(lèi)似。Control+CIHH和IgAN+CIHH組大鼠接受模擬3000米海拔低壓低氧環(huán)境，每天5小時(shí)，持續(xù)28天的CIHH適應(yīng)處理。實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)與第二部分相同。
　　結(jié)果：⑴海拔3000米CIHH處理4周后，與IgAN組大鼠相比， IgAN+CIHH組大鼠尿紅細(xì)胞計(jì)數(shù)及尿蛋白均顯著降低（P＜0.05），血肌酐及尿素氮水平明顯降低（P＜0.05）。⑵海拔3000

13、米CIHH處理4周后，與IgAN組大鼠相比，IgAN+CIHH組大鼠血清IgA水平明顯降低（P＜0.05），腎組織IgA免疫熒光及Western Blot實(shí)驗(yàn)顯示腎小球系膜區(qū)IgA沉積顯著減少（P＜0.05）。⑶海拔3000米CIHH處理4周后，與IgAN組大鼠相比，IgAN+CIHH組大鼠腎小球炎性改變減輕，雙重免疫熒光顯示系膜細(xì)胞增生明顯減少。⑷海拔3000米CIHH處理4周后，與IgAN組大鼠相比，IgAN+CIHH組大鼠血清BA

14、FF及IL-4水平降低（P＜0.05）。
　　結(jié)論：①通過(guò)改良方法建立的 IgAN大鼠模型從臨床表現(xiàn)、腎臟病理學(xué)改變、可能發(fā)病機(jī)制等方面均可部分模擬人類(lèi)IgAN的發(fā)病情況，是目前較為理想的IgAN動(dòng)物模型。②模擬5000米海拔的CIHH具有抗IgAN作用，能夠緩解臨床癥狀、改善腎功能和減輕腎臟病理?yè)p傷；其抗 IgAN作用可能與降低大鼠血清BAFF水平，減少B細(xì)胞過(guò)度活化有關(guān)。③模擬3000米海拔的CIHH具有抗IgAN作用，可以緩