抑郁癥患者細(xì)胞因子中性粒細(xì)胞活化肽(ENA78)水平及其與文拉法辛療效的相關(guān)性研究.pdf

1、背景和目的:盡管過去幾十年中,對于抗抑郁藥物的研究取得很大的進(jìn)展,然而抑郁癥病因仍不明確,其生物學(xué)標(biāo)記物至今仍難以確定。近年來,相關(guān)研究表明中樞神經(jīng)免疫反應(yīng),尤其是細(xì)胞因子在抑郁癥的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用,但由于活體腦組織取材不現(xiàn)實,所以大部分抑郁癥的細(xì)胞因子水平研究主要聚焦于外周血的水平研究,希翼能找到抑郁癥的細(xì)胞因子生物學(xué)標(biāo)記物和可能的相關(guān)致病基因。然而到目前為止,關(guān)于抑郁癥的外周血細(xì)胞因子水平研究結(jié)果卻很不一致。找到一個與抑郁癥

2、的細(xì)胞因子生物學(xué)標(biāo)記物猶如大海撈針。隨著轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展及基因表達(dá)譜芯片技術(shù)的出現(xiàn),外周血表達(dá)譜芯片研究在腦組織取材困難的精神疾病當(dāng)中發(fā)揮著重要的作用,它能最小成本、快速、準(zhǔn)確、靈敏地發(fā)掘潛在的相關(guān)的候選基因。本研究擬通過全基因組表達(dá)譜芯片技術(shù)篩查出差異最為顯著的細(xì)胞因子,再經(jīng)過獨立大樣本驗證該基因的差異表達(dá)。因為作為生物學(xué)標(biāo)記物,外周血的血漿水平更易于測定,所以本研究同時研究該基因的血漿水平。進(jìn)一步為探討抑郁癥患者該血漿水平的改變是

3、狀態(tài)性抑或是特質(zhì)性,了解其是否隨著藥物治療而變化,故而在另一獨立樣本中研究文拉法辛對其血漿水平的影響及其血漿水平與文拉法辛療效的關(guān)系,同時再次驗證抑郁癥患者與健康對照之間該血漿蛋白濃度的差異。
　　方法:(1)所有受試者均通過《DSM-Ⅳ-TR軸Ⅰ障礙定式臨床檢查病人版》(DSM-Ⅳ-TR axi sⅠ disorders-patient edition,SCID-I/P)定式診斷工具對患者進(jìn)行訪談。入組符合《美國精神疾病診斷手冊

4、》第4版修訂版(DSM-Ⅳ-TR)抑郁癥診斷標(biāo)準(zhǔn)的首發(fā)、未服藥的患者,評定漢密頓抑郁量表17項(Hamilton RatingSeale for Depression,HAMD-17);(2)對全基因組表達(dá)譜芯片研究中入組的抑郁癥患者及相匹配的健康對照各8例(樣本集1),抽取外周靜脈血提取總RNA進(jìn)行Affymetrix U133 plus2.0基因表達(dá)芯片檢測,篩查出差異表達(dá)最為顯著的細(xì)胞因子;(3)采用實時定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(

5、Real-time quantitativereverse transcriDtase polymerase chain reaction,RT-qPCR)方法,對樣本集1和獨立大樣本(樣本集2:首發(fā)、未服藥抑郁癥患者120例及相匹配的健康對照120例)驗證該細(xì)胞因子基因的差異表達(dá);(4)同時對于這部分樣本采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,EIASA)研究該細(xì)胞因子的血漿蛋白濃度

6、;(5)探討該細(xì)胞因子的血漿蛋白濃度的變化可能是狀態(tài)性抑或是特質(zhì)性改變,故入組另一獨立樣本(樣本集3:首發(fā)、未服藥的抑郁癥患者64例及相匹配的健康對照64例),患者予文拉法辛單藥治療隨訪8周,研究其血漿蛋白濃度的變化。同時根據(jù)治療8周后的HAMD17減分率將患者分成有效組與無效組,研究該細(xì)胞因子血漿蛋白濃度與文拉法辛療效的關(guān)系,及治療前該細(xì)胞因子血漿蛋白水平與文拉法辛療效的關(guān)系。同時也在這一樣本集中再一次驗證抑郁癥患者與健康對照之間該血

7、漿蛋白濃度的差異。
　　結(jié)果:(1)全基因組表達(dá)譜芯片研究(樣本集1)結(jié)果顯示,抑郁癥患者與正常對照組相比較,存在149個差異表達(dá)基因,其中95個上調(diào),54個下調(diào),通路分析(Pathway分析)顯示差異表達(dá)基因主要富集在15個PATHWAY中,其中細(xì)胞因子與細(xì)胞因子受體相結(jié)合通路最顯著,而中性粒細(xì)胞活化肽(ENA78)為表達(dá)差異最為顯著(下調(diào))的細(xì)胞因子;(2)通過RT-qPCR方法驗證了以上樣本(樣本集1)ENA78下調(diào),同時芯

8、片與RT-qPCR方法相關(guān)性較好(R2=0.6,p＜0.001)。同時在獨立大樣本中(樣本集2)使用RT-qPCR方法也驗證了抑郁癥患者外周血ENA78表達(dá)水平低于健康對照(0.35±0.15 vs.0.57±0.25,t=7.76,p＜0.001),且抑郁癥患者血漿ENA78濃度也顯著低于健康對照(2.33±0.34 vs.2.51±0.40,t=3.32,p=0.001);(3)在另一獨立樣本集中(樣本集3)再次驗證了抑郁癥患者血漿

9、ENA78濃度低于健康對照組(2.44±0.41 vs.2.81±0.32,t=5.82,p＜0.001)。進(jìn)一步根據(jù)文拉法辛療效將患者分成有效組(N=49)與無效組(N=12)后發(fā)現(xiàn),治療前無效組患者血漿ENA78濃度低于有效組患者(2.21±0.42 vs.2.50±0.39,p＜0.05,ANOVA Turkey法)。經(jīng)過文拉法辛治療8周后,血漿ENA78濃度與基線相比較更為下降(2.28±0.37 vs.2.44±0.41,t=

10、3.68.P=0.001)。然而分成有效組和無效組后發(fā)現(xiàn),有效組患者血漿ENA78顯著下降(治療前2.50±0.39 vs.治療后2.30±0.39,t=3.72,p=O.001),而無效組患者血漿ENA78濃度無變化(治療前VS.治療后2.21±0.42 vs.2.19+0.25,t=0.68,p=0.51)。
　　結(jié)論:(1)細(xì)胞因子與細(xì)胞因子受體結(jié)合通路與抑郁癥的發(fā)生可能有關(guān);(2)抑郁癥患者外周血ENA78水平下降,與抑郁