杭州市正常水禽中主要血凝性病毒的檢測.pdf

1、采集臨床正常鴨子泄殖腔棉拭子經0.22微米過濾除菌，并用先鋒Ⅵ作用后接種10日齡的雞胚，盲傳3代。對收獲的尿囊液進行HA試驗，將具有血凝性的尿囊液與ND標準陽性血清、禽流感H9和H5標準陽性血清、雞減蛋綜合癥標準陽性血清進行血凝抑制試驗鑒定，結果分離到了5株新城疫病毒和1株H5禽流感病毒。 其中分離到NDV的1號分離株和2號分離株的第2代、第3代雞胚全身出血，以頭部、足趾、翅膀出血尤為明顯。H<,5>亞型禽流感病毒致死胚也出現(xiàn)嚴

2、重的全身出血癥狀，雞胚死亡時間在24～60小時左右。 本研究根據(jù)AIV保守片段NP片段進行引物設計，以確定A型流感病毒的存在。在此基礎上，選擇禽流感病毒亞型決定片段HA基因為目的基因，設計8節(jié)段基因共同引物及HA基因特異性引物，以進一步鑒定其亞型及分析其致病性兩次RT-PCR擴增及HA全基因測序分析，提高了檢測的敏感性，且避開了由于HA基因在裂解位點的突變而導致的PCR的失敗。 對分離病毒的尿囊液進行AIV的RT-PCR